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循环无细胞DNA(circulating cell-free DNA,ccf DNA)是存在于血液中、主要来源于死亡细胞、包括死亡的肿瘤细胞碎裂为相对较短片段核酸。一些带有肿瘤特性的ccf DNA不仅可以在癌症转移患者的血液中被发现,而且也可存在于早期原发癌症患者的血液中。检测相应的ccf DNA的数量和性质,可以为恶性肿瘤的诊断及鉴别诊断提供参考依据。Alu是一种高度重复序列,含有这一重复序列的DNA片段在血清中出现的几率最高。在对乳腺癌的研究发现,当血清中肿瘤相关ccf DNA用Alu-247/Alu-l15的比值、即Alu完整性来代表时,该Alu完整性与疾病进展和瘤负荷呈正相关。为了找到卵巢癌患者ccf DNA的特性,我们设计了Alu-115 bp和Alu-219 bp片段引物,采用实时荧光定量PCR方法检测卵巢癌患者、卵巢良性肿瘤患者和正常人血清中ccf DNA(Alu-219和Alu-115的水平,并计算两者的比值),探讨Alu水平和完整性指数与卵巢癌的关系。本实验共分为两个部分。第一部分目的:检测血清中ccf DNA在卵巢癌患者、卵巢良性肿瘤患者和正常人中的含量,并计算完整性指数,探讨Alu水平和完整性指数在卵巢癌早期诊断中的意义。方法:采用实时荧光定量PCR方法检测24例卵巢癌、12例卵巢良性肿瘤,12例正常对照组血清中游离的Alu-219和Alu-ll5的水平。结果:(1)血清Alu-219片段含量和Alu完整性指数在卵巢癌组较卵巢良性肿瘤组和正常组明显升高(p=0.023,p=0.004),有统计学差异。Alu-219和Alu完整性指数的ROC曲线下面积的P值分别是0.006、0.002,说明以Alu-219和完整性指数用于诊断卵巢癌有显著意义。(2)利用Alu-219、Alu完整性指数和CA-125的cut off值诊断卵巢癌和卵巢良性囊肿的符合率分别是0.79(19/24)、0.96(23/24)、0.83(20/24),完整性指数的诊断符合率高于CA-125,说明Alu完整性指数也可用于卵巢良性肿瘤和正常人的鉴别诊断。结论:Alu-219和完整性指数有望在将来单独或与其他肿瘤标志物联合应用于卵巢癌的早期诊断,以及与卵巢良性病变的鉴别诊断。第二部分目的:检测血清中ccf DNA在卵巢上皮性癌患者术前、术后化疗后3月、术后化疗后6月的含量,探讨它们与卵巢上皮性癌临床分期、病理学分型和病情监测的关系。方法:采用实时荧光定量PCR方法检测26例卵巢上皮性癌和24例正常对照组血清中游离的Alu-219和Alu-ll5的水平。结果:(1)有腹膜后淋巴结转移或脉管转移者的血浆Alu完整性指数(0.58±0.07)较无转移者(0.46±0.12)明显升高(P=0.025)。(2)手术化疗后6个月,卵巢上皮性癌患者的血浆Alu-219含量(11.79±9.99)基本恢复到正常人水平(7.55±5.43),两者相比无差异(P=0.087)。(3)手术化疗后6个月,卵巢上皮性癌患者的血浆Alu完整性指数(0.41±0.17)较手术前(0.49±0.12)下降(p=0.050),基本恢复到正常水平(与正常相比P=0.714)。(4)将正常对照完整性95%可信区间上限为界值,将卵巢上皮性癌患者分为高血浆Alu完整性指数组和低完整性指数组,根据Log Rank(Mantel-Cox)统计法,高血浆Alu完整性指数组的累积生存率明显低于低血浆Alu完整性指数组,两组累积生存率有差异(P=0.037)。结论:Alu-219和Alu-完整性指数可以用于评估卵巢上皮性癌是否发生远处转移和术后病情的监测。