二烯丙基二硫抑制PKM2干扰胃癌细胞能量代谢

来源 :南华大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:mihu0907
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目的探讨二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对HGC-27胃癌细胞能量代谢的影响,明确DADS可通过靶向抑制PKM2干扰胃癌细胞能量代谢。方法本研究通过体外培养HGC-27胃癌细胞,应用不同浓度的DADS(0mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L)处理胃癌细胞48h后,运用比色法检测培养细胞上清液中葡萄糖及乳酸浓度,qRT-PCR检测PKM2mRNA表达情况,Western blot检测PKM2和LDHA蛋白的表达。筛选PKM2最佳片段,利用RNA干扰技术,沉默HGC-27细胞PKM2基因表达,实验分五组(mock组,scramble组,sh-PKM2组、sh-PKM2+DADS组及DADS组),再检测DADS对沉默PKM2后HGC-27细胞的葡萄糖及乳酸浓度,同时观测PKM2 mRNA、PKM2和LDHA蛋白的表达变化情况。结果1、DADS抑制胃癌细胞对葡萄糖摄取及乳酸生成与空白组相比,实验组上清液中葡萄糖浓度逐渐上升、乳酸浓度逐步下降,并呈剂量-效应依赖关系(P<0.05);2、DADS下调胃癌细胞中PKM2、LDHA蛋白表达与空白组相比,PKM2mRNA表达下调(P<0.05);与空白组相比,PKM2及LDHA蛋白的表达水平呈浓度依赖性下降。3、PKM2是DADS调控的靶基因沉默PKM2后,与sh-PKM2组相比,sh-PKM2+DADS组培养细胞上清液葡萄糖浓度、乳酸浓度差异无统计学意义(P>0.05);与mock组相比,DADS组培养细胞上清液葡萄糖浓度上升、乳酸浓度下降,其差异有统计学意义(P<0.05)。与sh-PKM2组相比,sh-PKM2+DADS组PKM2mRNA差异无统计学意义(P>0.05);与mock组相比,DADS组PKM2mRNA表达下调,其差异有统计学意义(P<0.05)。与sh-PKM2组相比,sh-PKM2+DADS组PKM2和LDHA蛋白表达无明显差异;与mock组相比,sh-PKM2组和sh-PKM2+DADS组PKM2和LDHA蛋白表达明显下调。结论:1.DADS抑制胃癌细胞能量代谢。2.DADS可能通过靶向抑制PKM2干扰胃癌细胞能量代谢。
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