出芽短梗霉双产物发酵及其应用研究

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聚苹果酸poly(β-L-malic acid)(PMLA)是一种以L-苹果酸为唯一单体的完全生物可降解性高分子聚合物,具有极佳的水溶性、易修饰性、易代谢性和生物相溶性,是一种具有广阔应用前景的生物学材料。   本研究利用出芽短梗霉Aureobasidium pullulans IFO6353发酵合成PMLA,同时得到其胞外水溶性多糖普鲁兰。普鲁兰是一种优良的高分子材料,具有重要的工业应用价值。   有机溶剂沉淀法和透析法对发酵液中的PMLA和普鲁兰多糖进行分离纯化。核磁共振(NMR)和傅立叶红外吸收光谱(FT-IR)对产物进行了结构分析。凝胶渗透色谱(GPC)测定PMLA的分子量,其Mw和Mn分别是是8505和8326。在单因素试验的基础上应用正交试验法对Aureobasidium pullulans IFO6353发酵培养基进行优化。利用优化后的培养基进行发酵,与优化前相比较,其产率提高了41.8%。优化后的最高产率比初始培养基的产率提高了约12倍,最高产率达2.0809 g/L。   利用ATMT(Agrobacterum tumefaciens-mediated transformation)方法,通过与重组根癌农杆菌LBA4404Hyg共培养,得到了一株黑色素合成缺陷的基因工程菌。利用细胞核染色和PCR方法对于获得的工程菌进行了检证。采用潮霉素特异性引物对该突变株的基因组总DNA进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳显示得到了目的条带。对该基因工程菌进行发酵研究,其初始聚苹果酸合成产率为0.1058 g/L。   聚苹果酸与十四烷基三甲基溴化铵(MTAB)通过静电作用生成两亲型梳形复合物PMLA-MTAB。利用核磁共振法检测产物。应用透析法制备复合物包载紫杉醇的纳米粒子。通过MTT法比较胶束包载紫杉醇与单纯紫杉醇对Hela癌细胞的增殖抑制作用。结果显示,PMLA-MTAB载药胶束与单纯紫杉醇给药方式对比,相同浓度下能起到相似的抑制效果。两亲型疏水型复合物PMLA-MTAB有望作为疏水性抗癌药物的新型控释材料。
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