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α-甘露糖苷酶（α-mannosidase, AMA）是糖苷水解酶家族的成员之一，广泛存在于微生物、动植物体内，参与细胞内蛋白质的加工、成熟过程。我国西部草场的主要有毒植物疯草，严重危害草地畜牧业，除了破坏草地生态，更造成山羊、马、绵羊等动物的中毒死亡，每年经济损失数以亿计，已成草原中亟待解决的热点问题。疯草中毒原因是其主要毒性成分苦马豆素（swainsonine, SW）能够抑制细胞中溶酶体AMA（lysosomalAMA, LAM）活性，导致动物死亡。对于疯草敏感动物AMA研究中，目前已获得了敏感动物山羊LAM（Capra hircas LAM, chLAM）的基因序列（accession no. JN602369），并通过对chLAM的分子空间结构的分析和预测，推测chLAM分子由五个亚基构成，编码其基因序列上的9个保守的氨基酸位点构成其活性中心。本研究分别截短、扩增含有活性中心亚基的基因序列，将其作为目的基因构建酵母表达载体。经过对重组菌株的诱导，获得其表达产物，对其表达产物进行鉴定，分析LAM产生活性的机制，结果如下：1.根据对chLAM的分子空间结构的分析和预测，设计A、C、D、T不同片段的特异引物，通过PCR方法，获得含有活性中心的目的基因序列：chA，chC，chD和chT。2.成功构建了酵母表达重组质粒pPIC9K-chA, pPIC9K-chC，pPIC9K-chLD和pPIC9K-chT，线性化后电转入表达菌株GS115，经过甲醇诱导表达后，对重组菌株表达产物进行AMA活性检测，发现只有chLAMt有活性，达到35U，其余3个重组表达菌株表达产物均无AMA活性。3.使用His标签纯化柱试剂盒，对含有His标签的表达产物chLAMt进行纯化，10%聚丙烯凝胶电泳检测。结果显示，可在10%聚丙烯凝胶上显示纯化出分子量大小约为90kDa的蛋白。4.对已纯化的chLAMt进行western blot检测。通过计算机成像分析，得到PVDF膜在相应分子量区域（90kDa）见抗原条带，即为检测的chLAMt蛋白条带。5. chLAMt的特性研究的结果显示，酶活性最适温度为45-55°C，最适pH值为5.5。同时， Zn2+、Ca2+对其活性有促进作用，Mg2+、Al3+、EDTA对其活性有抑制作用，与野生型的全长基因编码的chLAM有相似的酶活特性。