小鼠精子获能过程中钙调素结合蛋白的鉴定

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据研究报道,钙调素(calmodulin, CaM)介入了精子获能。钙调素本身不具有酶活性,是通过与其结合蛋白(calmodulin binding proteins, CaMBPs)的相互作用来参与生物体中多种生理活动的调控。精子特异性乳酸脱氢酶(sperm-specific lactate dehydrogenase C4,LDH-C4),是精子能量代谢的一个关键酶,特异性地存在于哺乳动物和鸟类成熟睾丸组织和精子中,为精子的运动和存活提供能量。目的:1.分离小鼠精子获能中与钙调素结合的蛋白质,并对其进行质谱鉴定。2.研究质谱鉴定结果中部分蛋白对小鼠精子获能的影响。方法:1.小鼠精子体外培养获能后,用SDS-PAGE法分离与钙调素结合的蛋白质,然后进行LTQ质谱分析;2.小鼠精子体外培养获能时,用草氨酸钠抑制小鼠LDH-C4的活性,再用金霉素荧光染色法(chlortetracycline,CTC)观察B型精子比例。结果:(1)小鼠精子获能后添加A23187诱导顶体反应,发现顶体反应率明显升高,证明精子获能成功;(2)分别得到精子蛋白质银染和考马斯亮蓝染色的图谱,质谱分析得到与钙调素相结合的如下7种蛋白质的肽质量指纹图:睾丸特异性乳酸脱氢酶,琥珀酸辅酶A连接酶,精子尾部外周致密纤维2,苹果酸脱氢酶,丙酮酸脱氢酶E1,L-乳酸脱氢酶,丙酮酸脱氢酶a2;(3)小鼠精子获能后LDH-C4活性明显增强;(4)加入草氨酸钠抑制剂,LDH-C4活性被抑制,同时B型精子比例降低。结论:1.精子获能过程中,上述7种蛋白质与钙调素结合;2.LDH-C4参与了精子获能。
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