【摘 要】
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鸭瘟病毒（Duck plague virus,DPV）能够引起鸭、鹅、大雁等雁形目禽类的急性、热性、败血性传染病。本论文构建了DPV LORF4基因缺失病毒,观察了该缺失病毒的毒力变化并对其免疫效果进行了评价。研究内容和结果如下:1.DPV-CHvΔLORF4缺失病毒构建利用本实验室构建的DPV CHv株细菌人工染色体（Bacterial Artificial Chromosome,BAC）平台以
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鸭瘟病毒（Duck plague virus,DPV）能够引起鸭、鹅、大雁等雁形目禽类的急性、热性、败血性传染病。本论文构建了DPV LORF4基因缺失病毒,观察了该缺失病毒的毒力变化并对其免疫效果进行了评价。研究内容和结果如下:1.DPV-CHvΔLORF4缺失病毒构建利用本实验室构建的DPV CHv株细菌人工染色体（Bacterial Artificial Chromosome,BAC）平台以及Red同源重组技术先后构建了LORF4基因缺失的感染性克隆（DPV-CHv-BAC-ΔLORF4）和去掉BAC功能元件mini-F的感染性克隆（DPV-CHv-ΔLORF4）。最后利用该感染性克隆转染、拯救得到仅缺失LORF4基因的DPV（DPV-CHvΔLORF4）。生长曲线测定结果显示:DPV-CHvΔLORF4与其亲本病毒CHv-50存在相似的增殖规律,两株病毒都在24～72h呈现逐步增殖的趋势且无论是在培养上清液或细胞中病毒的滴度都不存在显著性差异。以上结果说明LORF4基因的缺失不会影响DPV在宿主细胞的增殖,即LORF4基因为DPV复制非必需基因。2.DPV-CHvΔLORF4缺失病毒安全性评估以TCID50为104、105、106、107的DPV-CHvΔLORF4缺失病毒分别接种14日龄雏鸭并设置亲本病毒CHv-50株对照。结果显示:接种CHv-50株的雏鸭出现了高热症状和死亡且雏鸭的死亡率和体温与接种的病毒滴度呈正相关,接种病毒滴度越高,雏鸭死亡数越多,引发高热的时间越快;而DPV-CHvΔLORF4缺失病毒各组的雏鸭均未出现体温变化和死亡。说明LORF4基因的缺失显著降低了DPV在鸭体内的毒力。鸭胚成纤维细胞及雏鸭体内连续传代检测结果表明DPV-CHvΔLORF4缺失病毒在连续传代过程中缺失的LORF4基因不会发生回复,传代过程中在雏鸭肝脏中的病毒载量稳定,致弱的毒力稳定,即LORF4基因的缺失具有良好的遗传稳定性。3.DPV-CHvΔLORF4缺失病毒免疫效果评估及抗体产生规律将DPV-CHvΔLORF4缺失病毒参考一羽份鸭瘟活疫苗剂量(107.7copies/只,即105TCID50)免疫14日龄雏鸭:（1）免疫后7 d用100 LD50DPV强毒攻毒,连续观察10d,结果DPV-CHvΔLORF4和疫苗免疫组鸭均未出现死亡而空白对照在7 d内全部死亡。说明DPV-CHvΔLORF4缺失病毒能够与商品化弱毒疫苗一样为雏鸭提供针对DPV强毒100%的攻毒保护;（2）中和抗体水平检测结果显示免疫后7 d即能够产生针对DPV的中和抗体,抗体水平在免疫后28 d内逐渐升高并与鸭瘟弱毒活疫苗诱导产生的抗体水平无显著性差异。综上,LORF4基因为DPV增殖的非必需基因,LORF4基因缺失的DPV对鸭的毒力显著下降、能诱导鸭产生中和抗体并对鸭瘟强毒攻毒有保护。
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