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目的脑血管病是我国的多发常见病,是三大致死病因之一,具有发病率高、致残率高、复发率高、死亡率高、治愈率低的特点。其中缺血性脑血管病可占其中的70%-80%。本课题通过建立MCAO大鼠模型(大鼠大脑中动脉阻塞模型),对术后大鼠进行神经功能学评分,观察片仔癀对局灶性脑梗死大鼠神经保护作用、血脑屏障的破坏及炎症损伤反应这三个最主要方面的影响,从基因、蛋白水平研究片仔癀对局灶性脑梗死大鼠各个重要指标的影响,探讨片仔癀在治疗缺血性脑血管病领域的应用价值及其作用机制。方法成年的健康雄性SD大鼠,体重260-280g。将大鼠随机分为假手术组、MCAO造模组、片仔癀大剂量组(PZHH)(48.6mg/100g. d)、片仔癀中剂量组(PZHM)(16.2mg/100g. d)、片仔癀小剂量组(PZHL)(5.4mg/100g.d)、脑得生组(NDS)(48.6mg/100g.d)、尼莫地平组(NMDP)(1.08mg/100g.d),每组动物10-12只。各药物组造模前灌胃给药3天,第4天给药30分钟后开始造模(模型组和正常组每天给予等体积的生理盐水)。除假手术组外,其余各组均采用改良的Longa方法制备MCAO大鼠模型,并根据醒后2小时Longa评分决定是否进行下一步实验。纳入标准的大鼠于造模后给药观察至第7天取材,腹主动脉取血后断头取脑,留取梗死侧脑组织,将其从丘脑正中切开,后面部分用10%甲醛固定后制作石蜡切片(4um厚度连续冠状切片)；前面部分迅速取大脑皮层共约200mg,分装于两个标记好的冻存管中,置于液氮罐中保存,通过免疫组织化学法、Western Blot法、实时荧光定量PCR法、ELISA法观察各项指标的表达变化。结果1大鼠局灶性脑梗死模型的制备及其神经功能学评分本实验对MCAO大鼠于术后清醒2小时进行神经功能学评分。正常组均未出现神经功能缺损症状,评分为0分；其余各组1-3分纳入标准,0分为造模失败、4分有可能出现脑出血,均不进行下一步实验。2片仔癀对局灶性脑梗死大鼠大脑皮层NGF表达的影响(免疫组织化学法)本实验通过免疫组织化学法检测片仔癀对局灶性脑梗死大鼠大脑皮层梗死周边区NGF表达的影响,结果显示：正常组可见少量NGF阳性细胞,脑缺血后NGF表达明显升高。与假手术组比较,各组表达均显著升高(p<0.01)。与模型组比较,各给药组表达均显著升高(p<0.01)。3片仔癀对局灶性脑梗死大鼠大脑皮层AQP4表达的影响(免疫组织化学法)本实验通过免疫组织化学法检测片仔癀对局灶性脑梗死大鼠大脑皮层梗死周边区AQP4表达的影响,结果显示：脑缺血后AQP4表达明显升高。与假手术组比较,各组表达均有所升高(p<0.05或p<0.01)。与模型组比较,各给药组表达均显著下降(p<0.01)。4片仔癀对局灶性脑梗死大鼠大脑皮层AQP4.Claudin-5蛋白表达的影响(western blot法)本实验采用western blot法,从蛋白水平观察片仔癀对局灶性脑梗死大鼠大脑皮层AQP4、 Claudin-5蛋白表达的影响。结果显示：AQP4：正常情况下微弱表达,脑缺血后表达明显升高。与假手术组比较,各组表达均显著升高(p<0.01)。与模型组比较,各给药组表达均有所下降(p<0.05或p<0.01)。Claudin-5:正常情况下高表达,脑梗死后表达明显下降。与假手术组比较,各组表达均有所下降(p<0.05或p<0.01)。与模型组比较,各给药组表达均显著升高(p<0.01)。5片仔癀对局灶性脑梗死大鼠大脑皮层AQP4、 Claudin-5mRNA表达的影响(实时荧光定量PCR法)本实验采用实时荧光定量PCR法,从基因水平观察片仔癀对局灶性脑梗死大鼠大脑皮层AQP4、 Claudin-5mRNA表达的影响。结果显示：AQP4：正常情况下微弱表达,脑缺血后表达明显升高。与假手术组比较,各组表达均有所升高(p<0.05或p<0.01)。与模型组比较,各给药组表达均显著下降(p<0.01)。Claudin-5:正常情况下高表达,脑梗死后表达明显下降。与假手术组比较,各组表达均显著下降(p<0.01)。与模型组比较,各给药组表达均显著升高(p<0.01)。6片仔癀对局灶性脑梗死大鼠血清ICAM-1、 VCAM-1表达的影响(ELISA法)本实验采用ELISA法对局灶性脑梗死大鼠血清中ICAM-1、 VCAM-1的含量进行测定,观察片仔癀对其表达的影响。结果显示：正常情况下ICAM-1、 VCAM-1呈低表达状态,脑梗死后ICAM-1、VCAM-1表达明显升高。与假手术组比较,各组表达均显著升高(p<0.01)。与模型组比较,各给药组表达均显著下降(p<0.01)。结论1片仔癀可促进脑梗死后NGF的表达,从而减少神经细胞的损伤；2片仔癀可减轻脑梗死后血脑屏障的损伤,从而减轻脑水肿；3片仔癀可减轻脑梗死后炎症损伤的破坏,从而减轻脑损害；4片仔癀可通过多途径,多机制减轻脑缺血损伤后的症状,促进脑保护；