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东部、西部马脑脊髓炎病毒可引起人和动物的严重感染,是我国出入境检验检疫中的一类检疫对象,我国目前尚未有这两种病的病例报道。随着马匹国际贸易和国际赛事的日益繁荣,来自不同的国家和地区、健康状况不同的马匹可能进口到我国,因此传入风险不断加大。对此,除实施严格的隔离检疫制度之外,还需研制快速、准确的检测技术作为储备。本研究针对口岸检疫实际需求,研究建立了东部、西部马脑脊髓炎病毒荧光RT-PCR检测方法和IgM抗体间接ELISA检测方法并应用于口岸临床样品的检测。采用TaqMan方法,在对东部、西部马脑脊髓炎病毒基因组序列多重比对基础上,设计合成简并引物和探针。通过优化各项反应条件,建立了两种分别针对东部、西部马脑脊髓炎病毒的实时荧光RT-PCR检测方法。为评价方法的灵敏度,通过体外转录制备了东部、西部马脑脊髓炎病毒保守区序列的核酸标准品cRNA,经稀释、分装、定量、均匀性和稳定性检验后,用于方法的灵敏度评价。结果显示建立的两种方法灵敏度均达到10拷贝/反应。特异性试验结果显示建立的方法特异,与收集的相关马病病原核酸无交叉反应。对临床样品的检测中进一步证实研制的荧光RT-PCR检测方法快速、敏感、特异且重复性好,检测时限3个小时以内。经基因扩增分别获取了东部、西部马脑脊髓炎病毒E2蛋白编码基因,进而将获得的E2基因分别克隆到原核表达载体,然后转化E.coli Rosseta细胞后进行诱导,SDS-PAGE结果显示外源基因获得表达。将表达产物作Western-blot鉴定,结果表明表达产物能够分别与东部、西部马脑脊髓炎病毒IgM阳性血清产生反应,表明其具有反应原性。以纯化后的重组蛋白分别包被酶标板,使用东部、西部马脑脊髓炎病毒IgM阴、阳性血清建立了检测东部马脑脊髓炎、西部马脑脊髓炎IgM抗体的间接ELISA方法。对建立的方法的敏感性、特异性进行评价后,经板内重复试验和板间重复试验证明检测方法重复性良好,并使用研制的两种ELISA检测方法对已知阴、阳性马血清样品进行了验证检测,检测结果与预期完全一致。