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牛瑟氏泰勒虫(Theileria sergenti)是经过蜱传播的泰勒科(Theileriidae)、泰勒属(Theileria)的血液原虫。临床上感染瑟氏泰勒虫的牛会出现慢性贫血和高热、黄疸,甚至死亡。当前,牛瑟氏泰勒虫病在全世界的各个地区分布较为广泛。随着全球经济贸易往来的日趋密集和养牛产业的不断扩大,各国之间牛类产品的交易量剧增,不同大洲或地区的国家相继报道了牛瑟氏泰勒虫病。在这种严峻的情况下,对牛瑟氏泰勒虫病的监控和防治提出了更新、更高的要求。实时荧光定量PCR (Real-time Fluorescent Quantitive Polymerase Chain Reaction,FQ-PCR) PCR反应体系中加荧光集团,通过受体发色团偶极-偶极的作用使能量由供体转移至受体,受体发射的荧光信号强度与DNA的产量成正比,因此通过检测荧光信号强度从而去测定产物的量,进而推出靶序列的初始量。该技术自1996年产生以来,经过不断地发展和完善,现在已经非常成熟并得到了广泛的应用。实时荧光定量PCR中的SYBR Green PCR方法可结合双链DNA结合而发出荧光,而TaqManPCR方法是利用探针使荧光基团与淬灭基团分离而发出出荧光。本试验根据牛瑟氏泰勒虫P33基因设计2对特异性引物,首先对标准品进行了制备和鉴定。把鉴定正确的标准品进行稀释后测定浓度。然后用稀释后的标准品建立SYBR Green PCR和TaqMan PCR方法。分别对两种方法进行引物浓度优化、敏感性、特异性、重复性等不同方面的研究。SYBR Green PCR方法中,引物最适浓度为0.4μmol/L;检测的线性范围为2.26×108拷贝/μL-2.26×100拷贝/μL;通过熔解曲线分析表明该方法具有良好的特异性；组内变异系数、组间变异系数、稳定性系数的CV值都小于5%,表明该方法重复性良好。而TaqMan PCR方法中,引物最适浓度为0.4μmol/L,探针浓度0.3μmol/L;检测的线性范围为2.26×108拷贝/μL-2.26×100拷贝/μL；通过熔解曲线分析表明该方法具有良好的特异性；组内变异系数、组间变异系数、稳定性系数的CV值都小于5%,表明该方法重复性较好。用本试验建立的TsP1-SYBR Green PCR和TsP1-TaqMan PCR与常规PCR方法进行比较。结果显示三种方法均有较好的特异性,而两种荧光定量PCR方法显示出较高的灵敏度,比常规PCR方法灵敏度提高了10000倍。对采自珲春市和松原市79份临床样本的检测结果显示,常规PCR方法检出率为36.71%、TsP1-SYBR Green PCR检出率为46.84%、TsP1-TaqMan PCR检出率为46.84%。TsP1-SYBR Green PCR和TsP1-TaqMan PCR符合率为100%。本试验建立牛瑟氏泰勒虫病的SYBR Green PCR方法和TaqMan PCR方法。该方法不但克服了其它诊断方法灵敏度低、易交叉污染、特异性差、假阳性率高、检测时间长等缺点,能更快速且敏感、高通量且准确定量的检测该病。本试验旨在为诊断牛瑟氏泰勒虫病提供更加精准的科学方法,从而为疫苗的免疫效果和药物的治疗效果提供实时的监测和评价服务。从而满足了牛瑟氏泰勒虫病的监控和防治的更新、更高的要求。