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第一部分：血小板源性生长因子D (PDGF-D)调节Notch和MMP9促进结直肠癌细胞迁移、侵袭和增殖目的：近几十年来,结直肠癌(CRC)在世界范围内最多发生的肿瘤之一,且每年死亡率居高不下。结直肠癌的发生发展主要涉及一系列癌基因的激活和抑癌基因的失活。PDGF-D在许多研究中被证实参与肿瘤细胞的迁移、侵袭、增殖、凋亡和转移等肿瘤生理学过程。然而PDGF-D在结直肠癌中所扮演的角色仍然不是很清楚。因此,本文探讨PDGF-D在结直肠癌中的表达情况、对肿瘤生物行为的影响及可能的分子机制。方法：采用免疫组织化学染色(IHC)方法检测45例结直肠癌组织及其对应的癌旁组织中PDGF-D蛋白表达,同时采用qPCR和Western blot方法检测组织中PDGF-D mRNA和蛋白水平的表达。采用qPCR方法筛选PDGF-D在结肠癌细胞系中表达情况,并采取Western blot方法证实。在SW480细胞中中采用慢病毒转染sh-PDGF-D-lentivirus下调PDGF-D表达水平,在HCT116细胞中转染cDNA-PDGF-D上调PDGF-D表达水平。采用流式细胞术检测转染后细胞凋亡情况；细胞transwell实验检测肿瘤细胞迁移和侵袭能力；采取CCK-8实验检测肿瘤细胞增殖能力。最后,通过qPCR和Western blot方法探讨可能存在的分子机制。结果：IHC结果显示PDGF-D在53.3%(24/45)结直肠癌组织胞浆中高表达,然而在对应的癌旁组织中PDGF-D高表达率为11.1%(5/45),P<0.0001。在结直肠癌组织中PDGF-D mRNA水平平均是癌旁组织的4.6倍,P<0.05。PDGF-D及其受体PDGFR在SW480细胞中高表达,在HCT116中低表达。在SW480细胞中下调PDGF-D水平表达后,细胞的迁移、侵袭和增殖能力明显下降,同时Notchl和MMP9蛋白表达水平下降；在HCT116细胞中上调PDGF-D水平表达后,细胞的迁移、侵袭和增殖能力明显增强,同时Notch1和MMP9蛋白表达水平对应升高。结论：PDGF-D在结肠癌中高表达,且PDGF-D通过Notchl/MMP9信号通路增强肿瘤细胞迁移、侵袭和增殖能力,促进结直肠癌的发生发展。因此,PDGF-D有望成为结直肠癌的一个重要指示信号和靶向治疗目标。第二部分：PDGF-D通过notchl调控twist1/MMP9促进结肠癌细胞迁移、侵袭及增殖目的：明确PDGF-D在结直肠癌中促进肿瘤迁移、侵袭和增殖的具体分子机制。方法：采用慢病毒转染下调PDGF-D在SW480细胞中表达后,转入Notchl cNDA上调Notchl表达,采用细胞transwell检测、CCK-8检测肿瘤细胞迁移、侵袭和增殖活性改变,同时采用qPCR和western blot筛选和检测下游信号分子改变；慢病毒转染上调PDGF-D在HCT116细胞中表达后,加入Notchl抑制剂DAPT下调Notchl表达,采用细胞transwell检测、CCK-8检测肿瘤细胞迁移、侵袭和增殖活性改变,同时采用qPCR和western blot筛选和检测下游信号分子改变。结果：在已下调PDGF-D表达的SW480细胞中,成功转入Notchl cNDA上调Notchl表达,肿瘤细胞的迁移、侵袭和增殖能力明显增强;Notchl表达上调后,Twistl和MMP9的表达水平明显上升。在已上调PDGF-D表达的HCT116细胞中,加入Notchl抑制剂DAPT共培养成功下调Notchl表达,肿瘤细胞的迁移、侵袭和增殖能力显著下降；Notchl表达下调后,Twistl和MMP9的表达水平明显受抑。结论：PDGF-D通过notchl调控Twist1/MMP9信号通路促进结肠癌细胞迁移、侵袭及增殖。