研究背景与研究目的:目前,研究者在缺血性脑血管病的防治方面做了大量工作,如溶栓、介入、抗凝等,尽管在一定程度上改善了脑血管病患者的预后,仍有大部分患者因为就诊不及时、病情复杂或病情较重等多种原因而留有不同程度的后遗症。许多机制如氧化应激、炎症反应、细胞凋亡等均参与到脑缺血损伤过程中,最终导致缺血脑组织的不可逆损害。近年来,实验报道和临床研究发现中医药在治疗缺血性脑血管病方面具有很大的优势。活血开窍颗粒是李平教授在治疗缺血性脑血管病的临床实践中得出的经验方,此方由天麻、葛根、川芎、牛膝、丹参、苏合香、远志、郁金和僵蚕9味中药组成,共奏活血开窍、通络化痰之功,并在多年的实践中取得了满意的疗效。本课题组经过前期的实验证明活血开窍颗粒可以清除损伤脑组织的自由基,降低其一氧化氮(nitricoxide,NO)、丙二醛(malondiadehyde,MDA)的含量,从而发挥脑保护作用,但活血开窍颗粒对缺血性脑损伤的抗炎作用及其机制尚未完全清楚。因此,本研究通过观察活血开窍颗粒对大脑中动脉栓塞模型大鼠缺血侧脑组织中高迁移率蛋白B1(high mobility group protein box 1,HMGB1)以及Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)含量的影响,探究其治疗缺血性脑卒中的可能作用机理,指导临床用药,并提供实验和理论依据。实验方法:采用SD大鼠(成年雄性健康)为实验对象,应用改良后的Zea-Longa线栓法建立大鼠右侧MCAO模型。将SD大鼠随机分为4组,分别是假手术组(Sham)、模型对照组(MCAO)、尼莫地平组(MCAO+尼莫地平)以及活血开窍组(MCAO+活血开窍),每组30只大鼠。尼莫地平组和活血开窍组预给药(灌胃)5天,每天一次,MCAO组和Sham组以同样方法予等量生理盐水(NS)灌胃。术后在6h,12h,24h及48h分别对大鼠进行行为功能学评分,并将评分后的大鼠断头处死,用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察缺血侧脑组织病理形态学改变,用2%的2,3,5-三苯基四唑氮红(triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色法测定脑梗死范围,用免疫组化、Western Blot和Real-Time PCR测定缺血侧脑组织中HMGB1、TLR4的表达。结果:1神经行为学功能评分:Sham组大鼠无明显神经行为学功能损伤,MCAO组、尼莫地平组及活血开窍组大鼠均表现出不同程度的左侧肢体偏瘫。尼莫地平组和活血开窍组的神经功能评分低于MCAO组(P<0.05)。尼莫地平组与活血开窍组神经功能评分无统计学差异。2脑组织病理学:与Sham组相比较,MCAO组出现明显的神经细胞变性坏死。尼莫地平组和活血开窍组与MCAO组相比,坏死神经细胞减少。3脑梗死范围:Sham组无梗死灶。与MCAO组相比,尼莫地平组和活血开窍组梗死范围缩小(P<0.01)。与活血开窍组相比,尼莫地平组脑梗死范围缩小更明显(P<0.01)。4 HMGB1及TLR4的表达:HMGB1及TLR4在MCAO组的表达较Sham组明显增高,予尼莫地平及活血开窍颗粒干预后,HMGB1和TLR4蛋白、mRNA表达及阳性细胞数减少(P<0.01)。结论:在脑组织缺血损伤过程中,HMGB1和TLR4的表达显著升高。活血开窍颗粒可以有效的改善神经缺损症状,减少脑梗死范围,从而发挥脑保护作用。其作用可能与下调HMGB1和TLR4的表达、抑制炎症反应有关。