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目的:
本实验拟通过测定抗菌多肽RISE-AP12TM对浮游状态下Porphyromonasgingivalis W83(P.g W83)的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度,了解抗菌多肽RISE-AP12TM对P.g W83的生长抑制作用;应用real-time PCR技术检测抗菌多肽RISE-AP12TM对P.g W83脂蛋白基因mRNA表达水平的影响,旨在为抗菌多肽RISE-AP12TM对P.g W83的抑菌、杀菌作用机制提供依据,为抗菌多肽RISE-AP12TM在临床上的推广应用提供理论支持。
材料与方法:
一、研究对象
抗菌多肽RISE-AP12TM及牙龈卟啉单胞菌W83模式株
二、试验方法
1、将-80℃保存的P.gW83复苏、传代,液体增菌,采用麦氏比浊法配制成P.g W83混悬液(106 CFU/ml)备用,微量液体稀释法测定抗菌多肽RISE-AP12TM对P.g W83的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度(minimal bactericidal concentration,MBC)。
2、应用real-time PCR技术检测抗菌多肽RISE-AP12TM对P.g W83脂蛋白基因mRNA表达水平的影响。
三、统计学分析
应用SPSS13.0统计软件进行统计分析,菌悬液在波长600nm处的光密度值A600nrn用平均数±标准差((x)±s)表示;以2-△△CT作为统计对象,采用单因素方差分析比较不同浓度抗菌多肽RISE-AP12TM处理的牙龈卟啉单胞菌W83脂蛋白基因mRNA表达的差异。P<0.05为差异有统计学意义。
结果:
一、抗菌多肽RISE-AP12TM对106 CFU/mlP.g W83的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度
抗菌多肽RISE-AP12TM对106 CFU/ml P.g W83的MIC为0.01mg/ml,MBC为0.02mg/ml。
二、抗菌多肽RISE-AP12TM对P.gW83脂蛋白基因mRNA表达水平的影响
抗菌多肽RISE-AP12TM对P.g W83 PG0717和PG0183 mRNA的表达有不同程度的抑制作用,尤其对PG0717 mRNA表达具有显著的抑制作用(P<0.05),且存在浓度依赖性。
结论:
1、抗菌多肽RISE-AP12TM对浮游状态下的P.g W83有抑制作用,MIC为0.01mg/ml, MBC为0.02mg/ml。
2、抗菌多肽RISE-AP12TM对P.g W83脂蛋白基因mRNA的表达均有不同程度的抑制作用。