论文部分内容阅读
目的: 巩膜细胞外基质的重塑在近视的发生发展中起着至关重要的作用,但是人们对巩膜胶原合成和降解的机制知之甚少。本课题组前期研究发现,形觉剥夺性近视小鼠巩膜后极部巨噬细胞尤其是M2型巨噬细胞数量有明显增加,并可能通过分泌TGF-β和MMP-2调控巩膜胶原的合成与降解,但是增多的巨噬细胞来源不明。本研究将探讨小鼠形觉剥夺近视过程中巩膜后极部增多的巨噬细胞的来源,从而进一步明确巩膜巨噬细胞在近视发生发展中的作用机制。 方法: 本实验以3周龄C57BL/6小鼠作为实验动物,经过屈光筛选后随机分为形觉剥夺组(FD组)和正常对照组(Control组),其中形觉剥夺组(FD组)右眼用不透光的眼罩遮盖,对侧眼不做处理。对照组小鼠不做任何特殊处理。在测量后第二天上午8点对小鼠形觉剥夺,上午8点至晚上20点对小鼠给予普通光照,晚上20点至早上8点为黑暗环境,然后选取不同时间点处死小鼠后取眼球不同部位进行检测,剥夺时间分别为1天、1.25天、1.5天、1.75天、2天、2.25天、2.5天、1周、2周。利用免疫荧光技术检测形觉剥夺小鼠巩膜后极部各亚型巨噬细胞数量的变化;利用Real-time PCR检测巩膜及视网膜MMP2、CD206、CCL2、M-CSF、IL-13、IL-4 mRNA水平的动态变化。 结果: 1、免疫荧光结果显示,小鼠形觉剥夺2周后,形觉剥夺眼巩膜后极部渗出型巨噬细胞数量明显增加; 2、在形觉剥夺1天的时候,与对照眼和对侧眼相比,剥夺眼小鼠巩膜中MΦ相关因子(CCL2、M-CSF、IL-13)在mRNA水平上就已有明显升高,在FD1d至FD2d之间,各因子(CCL2、M-CSF、IL-13)出现了一个下降的变化趋势,起初在上午8:00时,剥夺眼较正常对照眼呈现一个有统计学意义的升高,而后在下午14:00时,CCL2和M-CSF仍有升高,但趋势已不如之前明显,之后在晚上20:00时,这种升高趋势已变得非常微弱,最后在凌晨2:00时,各组间mRNA水平的变化已无任何差异; 在FD2d时,形觉剥夺眼巩膜上MMP-2、CD206、CCL2、M-CSF、IL-13较正常对照眼都有显著增加,而MΦ自我增殖因子IL-4却无明显改变,在FD2d到FD3d期间,各因子出现了如同FD1d和FD2d之间同样的变化(先升高后降低); 在FD1W时,形觉剥夺眼巩膜上MMP-2、CD206、CCL2、M-CSF、IL-13较正常对照眼都有明显增加,且各因子的变化显得尤为显著,在形觉剥夺2周时,各组间CCL2已无明显差异; 3、在FD1d和FD2d时,与对照眼和对侧眼相比,剥夺眼小鼠视网膜上各因子均无明显升高,在FD1W时,CCL2才有增加。 结论: 1、小鼠形觉剥夺性近视中巩膜增多的巨噬细胞主要来源于血液中单核细胞的趋化而非组织原位巨噬细胞增殖; 2、形觉剥夺性近视中,巨噬细胞的变化主要发生在巩膜,即表现为巩膜特异性变化。