目的:前期研究发现莪术醇对肝窦内皮细胞的超微结构和功能产生影响,能造成基底膜的形成,失窗孔化,致肝脏微循环障碍,但是这些细胞因子和细胞产物的改变对肝窦内皮细胞结构及功能影响的程度及其作用方式尚不明确。本研究选择肝窦内皮细胞的信号通路的相关蛋白作为检测指标来观察细胞模型孵育过程中分泌行为,揭示肝纤维化病变与肝窦内皮细胞信号通路的相关蛋白数量改变之间的关系,以探讨肝窦内皮细胞分泌机制。方法:先使用瘦素造模,建立肝纤维化肝窦内皮细胞模型,将细胞实验分组:取培养至对数生长期肝窦内皮细胞,分别进行分组:空白对照组;瘦素激活模型对照组(培养液中加入Leptin终浓度为l00μg/L进行肝窦内皮细胞的活化);莪术醇组(先以Leptin将细胞激活后,加入莪术醇终浓度为50mg/L)水仙碱干预对照组(Leptin激活细胞后,给药终浓度6.25μg/mL)丹参酚酸B干预对照组(Leptin激活细胞后,给药终浓度为10-6mmol/L)。从整体细胞模型研究莪术醇对肝窦内皮细胞的分泌功能以及对分泌的TLR4通路核心表达因子的影响。采用观察肝窦内皮细胞超微结构,判断和比较各族肝纤维化的程度、差异以及药物作用的动态效果;实时荧光PCR检测各组分泌的TLR4信号通路(TLR4、MyD88、NF-κBp65)的信使RNA的表达水平;免疫蛋白印迹检测分泌的TLR4信号通路(TLR4、MyD88、NF-κBp65)蛋白表达水平;以及p-ERK、p-JNK、和p-P38的表达水平。实验数据采用SPSS22.0统计软件进行分析。结果:1.莪术醇对HSEC超微结构病变影响的研究结果显示,扫描电镜观察到经瘦素诱导激活的HSEC,其窗孔直径变小,窗孔数量大幅减少,甚至消失,出现“失窗孔化”现象。经莪术醇药物干预后,对比与瘦素激活模型组,窗孔变大,窗孔数量明显增多。2.实时荧光定量PCR检测结果:①瘦素模型组的TLR4、MyD88、NF-κBp65表达量明显高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05);②秋水仙碱组的TLR4、MyD88、NF-κBp65表达量明显高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05);③丹参酚酸B组的TLR4、MyD88、NF-κBp65表达量明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);④莪术醇组的TLR4、MyD88、NF-κBp65表达量明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。3.免疫印迹检测结果:①瘦素模型组的TLR4、MyD88、NF-κBp65以及p-ERK、p-JNK、和p-P38表达量明显高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05);②秋水仙碱组的 TLR4、MyD88、NF-κBp65 以及 p-ERK、p-JNK、和P38表达量明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);③丹参酚酸 B 组的 TLR4、MyD88、NF-κBp65 以及 p-ERK、p-JNK、和 p-P38 表达量明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);④莪术醇组的TLR4、MyD88、NF-κBp65 以及 p-ERK、p-JNK、和 p-P38 表达量明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.莪术醇对肝纤维化的HSEC超微结构和分泌功能的改变效果明显,说明莪术醇对肝脏病理损伤有一定的保护作用。2.莪术醇抑制了 HSEC分泌的TLR4通路核心表达因子的表达水平,对TLR4信号通路具有调控作用,从而改善肝纤维化。3.莪术醇对HSEC分泌的p-P38、p-ERK、p-JNK等靶点也具有调节作用,能抑制MAPK通路核心因子的表达水平,进而从HSEC结构和分泌功能改变及相互关系的新视角阐明莪术醇治疗肝纤维化的分子机制,为莪术醇对肝纤维化的影响研究提供了新思路。