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背景和目标：肿瘤/睾丸抗原(cancer/testis antigens，CTAs)在除睾丸之外的正常组织中不表达，而高表达在各种肿瘤组织中。基于这一特性，其在肿瘤免疫治疗中发挥的潜在作用越来越受到人们的重视。睾丸特异蛋白酶50（Testes-specific protease50，TSP50）是利用甲基敏感差异分析法从乳腺癌组织和睾丸组织中分离出来的一段低甲基化基因。研究报道，TSP50在乳腺癌、肺癌和正常睾丸中高表达，而在正常组织中不表达，认为TSP50是一个肿瘤-睾丸抗原。目前认为，肿瘤/睾丸抗原的表达受基因启动子区域甲基化水平的调控。本实验通过免疫组织化学染色技术检测人结肠癌组织中TSP50蛋白的表达情况，通过RT-PCR方法筛选TSP50阳性和阴性结肠癌组织，进而用亚硫酸氢盐直接克隆测序法检测二者TSP50启动子区域CpG岛的甲基化水平，从而探讨TSP50的表达与其启动子区域甲基化水平的相关性。方法：本实验收集人结肠癌石蜡标本48例，运用免疫组织化学染色技术检测结肠癌中TSP50蛋白的表达水平。同时收集人结肠癌新鲜组织标本5例，分别提取其总RNA，用RT-PCR的方法检测5例标本中TSP50mRNA的表达情况，筛选出TSP50阳性和阴性的结肠癌组织。随机选取TSP50阳性和阴性标本各一例，提取组织基因组DNA，运用亚硫酸氢盐直接克隆测序法分别检测二者DNA启动子区域的甲基化水平。结果：48例结肠癌中，高分化结肠腺癌39例，中分化结肠腺癌3例，低分化结肠腺癌2例，粘液癌4例。免疫组织化学染色结果显示，45例TSP50蛋白表达阳性，阳性率高达94%，各组不同类型肿瘤之间没有显著性差异。RT-PCR电泳检测显示，在5例标本中，有3例mRNA表达阳性，其余2例表达阴性。亚硫酸氢盐克隆测序法显示，在1，2，4，5，6，7，8，12这八个CpG位点上，TSP50阳性和阴性结肠癌启动子区域甲基化水平分别为0-16.7%，50%-83.3%。TSP50阳性的结肠癌组织DNA启动子区域甲基化水平明显低于TSP50阴性的结肠癌。结论：1. TSP50在结肠癌组织中高表达，TSP50可以作为结肠癌临床鉴别的一个新的标志物，也可以作为免疫治疗的新靶点。2. TSP50阳性的结肠癌组织DNA启动子区域甲基化水平明显低于TSP50阴性的结肠癌。启动子区域的甲基化水平调控着TSP50的表达。