研究目的：　　在人类精子中线粒体是主要的产能器官，对精子活力和功能的维持至关重要。大量研究表明，精子活力与线粒体ROS（mROS）水平密切相关。UCP2是位于细胞线粒体内膜的抗氧化蛋白，对调节mROS和线粒体功能发挥着重要作用。本实验的研究目的主要是探讨在人类精子中UCP2和mROS，以及精子活力之间的关系和UCP2调控精子活力可能调控机制。　　方法：　　（1）比较分析正常生育男性（NS组）和弱精患者（AS组）精子间mROS、线粒体膜电位（MMP）和ATP含量差异；通过免疫荧光分析UCP2在精子中的定位，以及通过western blot分析精子UCP2蛋白表达情况；（2）通过UCP2特异性功能抑制剂（京尼平）抑制精子UCP2功能，其作用浓度分别为0，20,50,100（umol/L），2小时后观察UCP2蛋白表达情况、精子活力、mROS、MMP和ATP含量的差异；（3）通过体外添加H2O2增加精子中ROS水平，浓度分别为0，25，50，100（umol/L）,作用时间为30分钟后观察mROS水平、精子活力及UCP2表达的变化；（4）通过体外添加抗氧化剂NAC，促进精子ROS的清除， NAC的作用浓度分别为0,25,50,100（umol/L），作用时间为2小时后观察mROS,精子活力及UCP2的表达变化。　　实验结果：　　（1）通过流式细胞仪检测NS组和AS组精子mROS含量和MMP水平，显示NS精子中mROS含量显著低于AS组。相反，MMP水平则显著高于AS组，差异均有统计学意义（P＜0.05）；　　（2）通过生物学发光法比较分析了NS和AS精子ATP含量，结果显示与NS组相比，AS组精子ATP含量显著降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；　　（3）通过免疫荧光技术分析UCP2在精子中表达位置，实验结果显示UCP2特异性表达于精子颈部线粒体鞘部。WB技术分析了正常和弱精子症组精子的UCP2蛋白表达差异，结果显示：弱精子症患者UCP2表达显著低于正常人群（P＜0.05）。　　（4）京尼平处理精子后，通过western blot分析精子中UCP2表达变化，发现京尼平作用精子2h后，与正常组相比精子中UCP2蛋白表达水平显著下降，差异有统计学意义（P＜0.05）。京尼平作用精子2h后，精子活力和曲线速度（VCL）显著下降，差异有统计学意义（P＜0.05）；而精子mROS水平则显著提高（P＜0.05）；相反，精子MMP在100umol/L组显著上升，差异有统计学意义（P＜0.05）；而ATP含量的变化与正常组相比，没有显著差异。　　（5）H2O2作用精子后与正常组相比精子活力和前向运动能力在50（umol/L）和100（umol/L）有显著下降，差异有统计学意义（P＜0.05）；VCL显著下降，差异有统计学意义（P＜0.05）；H2O2作用后与正常组相比精子中mROS显著上升,差异有统计学意义（P＜0.05）；而 UCP2表达水平与正常组相比在25（umol/L）和50（umol/L）有显著上升，差异有统计学意义（P＜0.05）；　　（6）NAC作用精子后，通过CASA仪分析精子活率，结果显示与正常组相比在200(umol/L)组精子活率显著下降，差异有统计学意义（P＜0.05）；NAC作用精子2小时后与正常组相比精子活力和精子前向运动能力没有显著变化而精子VCL在50（umol/L）和100（umol/l）显著上升，差异有统计学意义（P＜0.05）；此外NAC作用精子2小时后与正常组相比精子中mROS显著下降，差异有统计学意义（P＜0.05）；而 UCP2蛋白表达水平与与正常组没有显著差异。　　实验结论：　　（1）人类精子活力与精子中 mROS,和MMP和ATP含量密切相关；　　（2）UCP2表达水平与人精子活力密切相关，高活力精子UCP2表达水平高于低活力精子；　　（3）精子中存在着UCP2-mROS相互调控系统：精子中mROS水平上升可反馈性增加UCP2的表达，而UCP2可以加速精子中mROS的清除;　　（4）UCP2对mROS的调控主要是通过增加精子线粒体中mROS清除能力，而mROS水平可以反馈性增高UCP2的表达。