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目的研究慢性HBV感染不同阶段细胞免疫及其与病毒清除的关系。方法用流式细胞仪检测50例慢性HBV感染者外周血的T细胞亚群。选择其中进行肝组织穿刺活检术的慢性乙型肝炎住院病例40例,留取活检肝组织分别进行苏木素伊红染色和免疫组织化学CD4、CD8染色,并用实时荧光定量PCR的方法检测肝组织内的HBV-DNA定量。10例正常对照肝组织选自肝血管瘤手术患者瘤旁正常肝组织。结果1.慢性HBV感染组与正常对照组T细胞亚群比较。T细胞亚群在慢性HBV感染组与正常对照组间比较,差别无统计学意义(P>0.05)。然后将慢性HBV感染组根据HBV-DNA定量分为HBV-DNA阳性组和HBV-DNA阴性组比较发现:HBV-DNA阳性组的CD4+T细胞百分率及CD4/CD8比值较HBV-DNA阴性组及正常对照组明显降低(P<0.05,P<0.01, P<0.05,P<0.05),但是T细胞亚群在HBV-DNA阴性组与正常对照组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。2.慢性HBV感染的不同阶段外周血T细胞亚群的变化。外周血T细胞亚群在慢性HBV感染免疫耐受期、免疫清除期、低(非)复制状态、再激活期、正常对照组5组间比较CD4+T细胞百分率及CD4/CD8比值差异显著(P<0.05,P<0.05),进一步进行组内比较发现:免疫清除期的CD4+T细胞百分率及CD4/CD8比值较低复制状态明显减低(P<0.05,P<0.05);免疫清除期及免疫耐受期的CD4+T细胞百分率、CD4/CD8比值均较正常对照组明显减低(P<0.01,P<0.05, P<0.05,P<0.05);其它组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。3.外周血T细胞亚群与外周血及肝组织中HBV-DNA定量的相关性分析。CD4/CD8比值与外周血HBV-DNA定量呈负相关(r= -0.308,P<0.05)。CD3+T细胞百分率、CD4+T细胞百分率、CD8+T细胞百分率与外周血HBV-DNA定量无相关性。外周血T细胞亚群与肝组织中的HBV-DNA定量亦无相关性。在慢性HBV感染的不同阶段,亦未发现T细胞亚群与HBV-DNA定量相关。4.肝组织中CD4、CD8阳性细胞的表达。正常肝组织中有少量CD4和CD8阳性细胞表达,慢性乙型病毒性肝炎患者的肝组织中可见CD4阳性及CD8阳性细胞表达,CD4阳性细胞主要集中在汇管区,CD8阳性细胞主要聚集在汇管区及炎性肝细胞的周围。5.CD4、CD8阳性细胞在HBV-DNA不同复制状态肝组织中的表达。CD4、CD8阳性细胞在慢性HBV感染者肝组织中的表达明显多于正常肝组织的阳性表达量(P<0.01,P<0.01)。CD4、CD8阳性细胞在HBV-DNA阳性组肝组织中的表达明显多于正常对照组(P<0.001,P<0.001),也多于HBV-DNA阴性组,但是差异无统计学意义(P>0.05,P>0.05);CD8阳性细胞在HBV-DNA阴性组肝组织中的表达明显多于正常对照组(P<0.01),但是CD4阳性细胞的表达在两者间比较差异无统计学意义(P>0.05)。6.CD4阳性细胞在慢性HBV感染不同阶段肝组织中的表达。免疫清除期、低复制状态及再激活期3组CD4阳性细胞明显多于正常对照组(P<0.001,P<0.001,P<0.001)。免疫耐受期CD4阳性细胞明显低于免疫清除期及再激活期(P<0.05,P<0.01)。其余组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。7.CD8阳性细胞在慢性HBV感染不同阶段肝组织中的表达。慢性HBV感染的4个不同阶段CD8阳性细胞均多于正常对照组(P<0.05, P<0.05, P<0.01 P<0.01)。CD8阳性细胞在免疫耐受期的表达明显低于再激活期(P<0.05)。其余组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。8.免疫活动期(免疫清除期和再激活期)细胞免疫状态的变化。肝组织中CD4、CD8阳性细胞的表达在此期明显高于免疫耐受期(P<0.01,P<0.05),CD4阳性细胞在此期的表达明显多于低复制状态组(P<0.05),CD8阳性细胞在此期的表达也多于低复制状态,但是差异无统计学意义(P>0.05)。外周血CD4+T细胞的百分率与外周血的HBV-DNA定量呈负相关(r=-0.481,P<0.05)。根据转氨酶的升高情况分为小于2×ULN(正常值上限)和大于2×ULN两组,在ALT≥2×ULN组中外周血CD4/CD8比值与肝组织中的HBV-DNA定量呈显著负相关(r=-0.829,P<0.05)。在小于2×ULN组中没有发现类似变化。9.对外周血HBV-DNA定量与肝组织HBV-DNA定量进行Spearman相关分析。外周血HBV-DNA定量与肝组织HBV-DNA定量显著正相关(r=0.779, P<0.001)。10.肝组织及血清HBV-DNA的检测。在血清HBV-DNA定量阳性的肝组织中均能检测到HBV-DNA的复制,而且在8例低复制状态组血清HBV-DNA阴性的肝组织内仍然可以检测到HBV-DNA的复制。结论1.慢性HBV感染时,机体及肝脏局部均存在免疫功能异常,HBV-DNA的复制加重了这种变化。本试验发现HBV-DNA阳性组外周血的CD4+T细胞百分率及CD4/CD8比值明显低于阴性组及正常对照, HBV-DNA阳性组肝组织中浸润的CD4、CD8阳性细胞明显多于正常。2.慢性HBV感染的不同阶段机体及肝脏局部所处的免疫状态不同。免疫清除期外周血CD4+T细胞百分率及CD4/CD8比值明显低于低复制状态,免疫活动期肝内浸润的CD4、CD8阳性细胞多于免疫耐受期及低复制状态。3.CD4+T细胞的减少不利于病毒的清除,而病毒的持续高复制状态可能影响了CD4+T细胞的增殖。在免疫活动期,外周血CD4+T细胞的百分率与外周血HBV-DNA定量呈负相关,而且在ALT≥2×ULN组外周血CD4/CD8比值与肝组织中的HBV-DNA定量呈显著负相关。4.肝组织中的HBV-DNA定量较血清HBV-DNA定量能更准确地反映肝细胞内病毒复制的水平。