CO2人工气腹对结肠癌细胞生物学行为影响的实验研究

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目的:通过模拟腹腔镜手术建立体外人工气腹环境,探讨腹腔镜术中CO2环境对结肠癌细胞体外生物学行为的影响,为腹腔镜技术用于胃肠道恶性肿瘤的安全性作初步评价,并提供相关的实验室证据。方法:本研究模拟腹腔镜手术CO2气腹环境,分别在不同CO2人工气腹灌注压下作用于人结肠癌LOVO细胞后,通过对不同时段的pH值测定、细胞计数、流式细胞术、半定量RT-PCR等检测手段,观察不同CO2气腹环境作用后人结肠癌LOVO细胞体外生长增值情况,分析暴露于CO2气腹对肿瘤细胞周期比率变化的影响,同时通过对与肿瘤侵袭转移密切相关的MMP-9、VEGF基因表达的变化来探讨CO2气腹环境对肿瘤细胞侵袭能力的影响。结果:(1)CO2对LOVO细胞外pH值的影响:CO2作用后即刻pH值明显降低,压力越大,pH值越低,pH值与压力呈负相关关系(P<0.05);脱离CO2环境后24小时,处理组pH值逐渐升高,仍低于对照组;随后处理组pH值逐渐上升至对照组水平,至72小时三组已无明显差异(P>0.05)。(2)流式细胞仪检测细胞周期:处理后24小时可见CO2明显抑制了LOVO细胞的生长,G1期细胞比例显著高于对照组,增殖指数降低,且呈压力依赖性,实验组与对照组相比均有显著性差异(P<0.01);分别在48小时,72小时,96小时分析流式细胞仪结果均显示细胞增殖指数与对照组仍有显著性差异(P<0.05),将细胞增殖指数分别与pH值和CO2气体的压力建立一元线性相关分析可见LOVO细胞的增殖指数与pH值无明显相关,而与CO2压力呈较好的线性负相关关系(r=-0.871)。(3)RT-PCR结果:CO2处理后LOVO细胞内MMP-9 mRNA表达水平逐渐降低,在处理后72h降至最低,在96h略有回升;VEGF mRNA表达水平迅速降低,于96h降至最低。对照组两者mRNA表达明显高于处理组,两两比较均有显著性差异(P<0.01),CO2气腹有抑制MMP-9和VEGF表达的作用,可能影响肿瘤的侵袭转移能力。结论:实验证实腹腔镜术中CO2气腹有抑制结肠癌细胞增殖的作用,并且能抑制与肿瘤细胞侵袭转移密切相关的因子MMP-9和VEGF的表达,从而说明CO2气腹可能对结肠癌细胞的生长及转移没有影响。因此,CO2气腹应用在腹腔镜的胃肠道恶性肿瘤外科手术中是安全的;CO2气腹并非是肿瘤复发和切口转移的必要条件,手术方式的选择也不是影响肿瘤预后的决定性因素。
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