枯草芽孢杆菌(Bacillus Subtilis B.,subtilis)可以改善肠道环境、促进机体营养物质的吸收并且还能通过激活免疫细胞提高免疫力。有研究发现枯草芽孢杆菌作为黏膜免疫增强剂能提高局部免疫应答,但其机制一直不清楚。已知枯草芽孢杆菌表达的抗菌脂肽如表面活性素、伊枯草菌素、泛革素等,在抗病毒、抗细菌、抗寄生虫等方面都有很好的效果,我们猜测枯草芽孢杆菌提高黏膜免疫应答可能与其表达的抗菌脂肽有关。为了探究此机理,我们进行了本次试验。首先对鸡滴鼻枯草芽孢杆菌、表达表面活性素的枯草芽孢杆菌、表达伊枯草菌素的枯草芽孢杆菌、表达泛革素的枯草芽孢杆菌,检测其对机体黏膜局部细胞免疫及体液免疫的影响,然后进行体外试验观察其对树突状细胞表型及功能的影响。通过研究表达不同脂肽的枯草芽孢杆菌对鸡黏膜先天性免疫力的作用,可进一步了解枯草芽孢杆菌及其脂肤提高局部黏膜免疫的机制,为其在黏膜免疫上更好的应用提供参考。1表达不同脂肽的枯草芽抵杆菌对鸡局部细胞免疫水平的影响细胞因子是先天免疫和适应性免疫系统的关键调节因子,而在局部黏膜细胞免疫中起作用的细胞因子有很多,如IL-1β、IL-6、IL-12、IFN-γ等,通过检测其表达量,可以在一定程度上反应局部细胞免疫水平。本试验选用36只SPF鸡,平均分为6组,3日龄首免,一周后加强免疫。分别滴鼻免疫PBS、枯草芽孢杆菌、表达表面活性素的枯草芽孢杆菌、表达泛革素的枯草芽孢杆菌、表达伊枯草菌素的枯草芽孢杆菌、聚肌胞。二免后的第三天宰杀动物取材,每只试验鸡取鼻腔、气管及空肠三部分。然后用酶联免疫分析(ELIS A)试剂盒对所取组织中的细胞因子进行检测。结果发现:表达不同脂肽的枯草芽孢杆菌能不同程度的提高所测组织中IL-1β、IL-6、IL-12及IFN-Y的表达量。其中表达表面活性素的枯草芽孢杆菌能更有效的提高组织中细胞因子的表达水平;其次为表达泛革素的枯草芽孢杆菌组;枯草芽孢杆菌和表达伊枯草菌素的枯草芽孢杆菌对鼻腔中IL-6的提高效果不显著。所用表达不同脂肽的枯草芽孢杆菌在提高鸡局部黏膜细胞免疫力上效果不同,提示我们脂肽可以增强枯草芽孢杆菌的黏膜先天性免疫效果,并且表面活性素能更好的刺激局部黏膜产生细胞因子。2表达不同脂肽的枯草芽抵杆菌对鸡局部体液免疫水平的影响分泌型免疫球蛋白A(Secretory immunoglobulin A,SIgA)是机体黏膜体液免疫的主要抗体,在各黏膜组织体液免疫中都有重要作用。SIgA表达量的变化可以作为衡量局部黏膜体液免疫水平的标准之一。本试验首先对鸡滴鼻免疫表达不同脂肽的枯草芽孢杆菌及PBS、聚肌胞,然后采取13、24、38日龄的血清、口腔拭子、泄殖腔拭子、鼻腔涮洗液、气管涮洗液、空肠涮洗液及盲肠粪便,并应用ELISA试剂盒检测血清中非特异性IgA及所取其他部位非特异性SIgA的表达水平。结果发现:非特异性SIgA及IgA表达量在各检测部位均呈先上升后下降趋势。与对照组相比,在所测日龄中表达不同脂肽的枯草芽孢杆菌都在一定程度上提高了机体黏膜抗体水平。表达表面活性素的枯草芽孢杆菌处理组的非特异性SIgA及IgA表达水平极显著高于对照组和其他枯草芽孢杆菌组;而表达泛革素的枯草芽孢杆菌组与表达伊枯草菌素的枯草芽孢杆菌、不表达脂肽的枯草芽孢杆菌相比,能更有效的提高机体非特异性SIgA的表达水平。这提示我们表达不同脂肽的枯草芽孢杆菌都可以在一定程度上提高鸡局部黏膜先天性体液免疫水平,并且表达表面活性素的枯草芽孢杆菌作用效果最好,其次为表达泛革素的枯草芽孢杆菌,说明脂肽在枯草芽孢杆菌提高黏膜先天性体液免疫中有一定作用,且表面活性素能有效的增强枯草芽孢杆菌的免疫效果。3表达不同脂肽的枯草芽孢杆菌对体外培养鸡骨髄源树突状细胞的影响树突状细胞是一种强大的抗原递呈细胞(APC),它可以刺激T、B淋巴细胞产生细胞因子及抗体,进而促进机体免疫应答。主要组织相容性复合物Ⅱ(MHCⅡ)表达量可以在一定程度上反应树突状细胞递呈的能力,成熟的鸡树突状细胞高表达MHCⅡ,递呈能力增加。为了探究表达不同脂肽的枯草芽孢杆菌对树突状细胞成熟及功能的影响,本试验首先体外分离鸡骨髓源树突状细胞,并对其形态及表型进行了鉴定,然后用流式细胞术检测表达不同脂肽的枯草芽孢杆菌处理后树突状细胞表面分子MHCⅡ的变化及其对T细胞的增殖作用。结果发现:表达表面活性素的枯芽孢杆菌和表达泛革素的枯草芽孢杆菌处理组能极显著的上调MHCⅡ的表达,并且表达表面活性素的枯草芽孢杆菌的作用效果明显高于表达泛革素的枯草芽孢杆菌组。而枯草芽孢杆菌和表达伊枯草菌素的枯草芽孢杆菌处理组对MHCⅡ的表达量虽有一定的提高,但效果不明显。另外表达表面活性素的枯草芽孢杆菌和表达泛革素的枯草芽孢杆菌处理组作用后的树突状细胞刺激T细胞增殖能力显著增加。这提示我们所用的几种枯草芽孢杆菌中表达表面活性素的枯草芽孢杆菌能更有效的提高树突状细胞的递呈及活化T细胞的能力,说明脂肽在促进树突状细胞成熟中有一定的作用,且表面活性素对树突状细胞成熟有更好的促进效果。