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猪圆环病毒2型(PCV2)，是新兴的猪病原体，自1998年被发现以来，给全球养猪业造成了巨大的经济损失。PCV2是目前已知感染哺乳动物最小的DNA病毒，基因组为单股环状，约1.7kb大小。最初PCV2引起的相关疾病综合症，被称为断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)。随着越来越多表现型的出现，如生殖障碍、肠道疾病和呼吸道症状等，才将PCV2引起的疾病统称为猪圆环病毒相关疾病PCVAD。2003年以来，PCV2流行基因型从PCV2a向PCV2b转变，PCV2b基因型的患病率在全球急剧增加，且病情更为严重。国内已有以PCV2b为抗原的全病毒灭活苗投入市场使用，且有较好的免疫效果，但亚单位疫苗与其相比拥有安全性高、纯度高、产量高等更多优点，仍然是国内PCV2疫苗研究的热点。 本研究以pEGFP-C3载体及实验室2003年分离到的PCV2-HZ0201(PCV2b)毒株为模板，分别扩增出GFP基因和ORF2基因，利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统，将目的基因插入pFastBac-Dual转移载体的多克隆位点，成功构建pFastBac-Dual-GFP-ORF2(在两个启动子下游分别插入GFP基因和ORF2基因)和pFastBac-Dual-2ORF2(在两个启动子下游都插入ORF2基因)重组转移载体;将重组载体转化入DH10Bac感受态细胞，在Tn7转座子的作用下与存在于感受态细胞中的杆状病毒基因组发生转座;经过蓝白斑筛选、PCR鉴定，获得重组的穿梭载体rBacmid-GFP-ORF2和rBacmid-2ORF2;转染Sf9细胞收获重组杆状病毒rBac-GFP-ORF2和rBac-2ORF2。以GFP荧光蛋白作为指示蛋白来判断重组杆状病毒感染细胞的情况，获得了高滴度的重组杆状病毒rBac-2ORF2;以P2代重组杆状病毒rBac-2ORF2不同的感染复数接种Sf9细胞，在不同的时间点收样，系统摸索出重组杆状病毒最佳病毒扩增条件为MOI值为0.5、感染Sf9细胞后144h收样，进一步确定Cap蛋白最佳表达条件为MOI值为2、感染Sf9细胞后96h收样。 以原核表达并纯化的GST-dCap标准蛋白定量检测真核表达Cap蛋白浓度可达到10μg/mL以上;利用蔗糖密度梯度离心纯化Cap蛋白，2％磷钨酸负染后在电子显微镜下观察到病毒样颗粒的形成。 通过PCV2胶体金试纸条半定量检测确定Cap蛋白抗原的免疫剂量，β-丙内酯以15000灭活重组杆状病毒，Montanide GEL01PR佐剂以5-20％乳化Cap蛋白。用制备的PCV2Cap蛋白免疫抗原，并以ZJ/C株PCV2灭活疫苗作对照分组免疫BALB/C雌鼠。IFA检测免疫后小鼠血清PCV2抗体效价、荧光定量PCR检测攻毒后小鼠血清和脾脏组织中PCV2病毒载量来评价疫苗的免疫原性。小鼠血清抗体效价结果显示Cap蛋白原液，5倍浓缩液免疫小鼠21d，28d均可诱导小鼠产生针对PCV2的抗体，其血清学转阳率可达8～10/10（IFA检测血清抗体效价≥1∶400），浓缩5倍样品免疫小鼠后产生血清抗体效价平均水平显著高于Cap蛋白原液，免疫28d后的血清抗体效价略高于免疫后21d，差别不显著。荧光定量PCR结果显示，免疫组小鼠脾脏组织中PCV2病毒载量显著低于未免疫组，说明Cap蛋白抗原可有效抵抗PCV2在小鼠脾脏组织中的复制;小鼠血清PCV2病毒载量结果显示免疫后小鼠血清中病毒载量显著低于未免疫组，病毒血症发生的概率低。小鼠免疫试验结果表明，制备的猪圆环病毒2型Cap蛋白免疫抗原能刺激小鼠产生针对PCV2的特异性抗体，有效抵抗病毒在小鼠体内的复制，说明该昆虫细胞表达的PCV2Cap蛋白抗原具有良好的免疫原性和免疫保护力，具有开发成猪圆环病毒2型疫苗的潜力。