【摘 要】
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在表观遗传学中,DNA与RNA的修饰已成为了研究热点。真核生物体内最显著的DNA修饰就是5m C。而m6A作为真核生物的一种新的修饰,最近才将其功能进行初步的研究。研究表明,Alk B家族归类于Fe2+和α-酮戊二酸（α-KG）依赖的加氧酶家族,Alk B家族参与多种生化反应调控,包括DNA与RNA的去甲基化调控。关于Alk B家族的研究都集中在细菌、斑马鱼和人。植物中的Alk B家族蛋白的研究仅
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在表观遗传学中,DNA与RNA的修饰已成为了研究热点。真核生物体内最显著的DNA修饰就是5m C。而m6A作为真核生物的一种新的修饰,最近才将其功能进行初步的研究。研究表明,Alk B家族归类于Fe2+和α-酮戊二酸（α-KG）依赖的加氧酶家族,Alk B家族参与多种生化反应调控,包括DNA与RNA的去甲基化调控。关于Alk B家族的研究都集中在细菌、斑马鱼和人。植物中的Alk B家族蛋白的研究仅有拟南芥的ALKBH2有报道。水稻中的OsALKBH1与大肠杆菌的Alk B同源性最高为34%,属于铁/α-酮戊二酸盐依赖型的双加氧酶Alk B蛋白家族。本研究通过HPLC等生化实验证明OsALKBH1对ss DNA的m1d A具有去甲基化的酶活,且其酶活强于m6d A。而且通过EMSA等实验证明OsALKBH1与ss DNA、ds DNA存在互作。我们成功地表达并纯化出不同长度的OsALKBH1截短片段的蛋白,添加不同的底物进晶体筛选,获得了OsALKBH1141-371蛋白复合物晶体,并解析出蛋白OsALKBH1141-371与Mn2+以及协同底物α-KG和琥珀酸的1.8埃晶体结构。该结构包含4个α螺旋以及12个β折叠。OsALKBH1141-371结构与大肠杆菌Alk B结构的RMSD仅为1.8埃。同样OsALKBH1具有两个典型的核酸识别盖子NRL（nucleotide recognition lid）,与其它已发表的Alk B家族结构不同的是,其核酸识别盖子NRL1具有3个碱性氨基酸,其中R188能够同α-KG形成盐桥,导致NRL1基本盖住部分活性中心入口。
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