乳酸和中药肿节风影响非小细胞肺癌增殖的分子机制研究

来源 :皖南医学院 | 被引量 : 1次 | 上传用户:az4112513
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目的:本课题旨在探究人非小细胞肺癌细胞株中乳酸与GPR81表达的相关性及其可能的分子机制,为临床肿瘤的治疗提供新的理论基础。方法:选取人非小细胞肺癌细胞株A549、H1299作为研究对象。(1)在蛋白水平,通过Western blot方法检测STAT3活性及GPR81蛋白表达量的变化;(2)在转录水平,通过双荧光素酶报告基因方法检测GPR81启动子活性;(3)在A549、H1299细胞中转染STAT3 cDNA或STAT3 siRNA并用不同浓度乳酸刺激,检测GPR81蛋白的表达;(4)在A549、H1299细胞中共转STAT3cDNA、GPR81启动子以及带有海肾荧光素酶基因的启动子,通过双荧光素酶报告基因方法检测STAT3 cDNA对GPR81启动子活性的影响。结果:在A549、H1299细胞中:(1)STAT3活性随乳酸浓度升高而升高,GPR81蛋白表达量随乳酸浓度升高而增加;(2)GPR81启动子活性随乳酸浓度升高而增强;(3)转染STAT3 cDNA或STAT3 siRNA后,p-STAT3蛋白表达与GPR81蛋白表达一致;(4)STAT3 cDNA可以增强GPR81启动子活性。结论:1.乳酸可以激活A549、H1299细胞中STAT3的磷酸化活化和GPR81蛋白的表达,这种作用具有浓度依赖性。2.STAT3作为转录因子可以在转录水平促进GPR81的表达。目的:研究肿节风分散片(ZJF)对人非小细胞肺癌A549、H1299细胞增殖的影响,及其具体的分子机制。方法:首先采用MTT法研究不同浓度肿节风对A549、H1299细胞生长的抑制作用并计算其细胞增殖抑制率;采用流式细胞仪检测肿节风对A549、H1299细胞周期的影响;然后通过Western blot方法检测不同浓度肿节风处理后,A549、H1299细胞内p21和p-Smad3的蛋白表达以及TGF-β通路抑制剂(SIS3 HCL)处理后,A549、H1299细胞内p21和p-Smad3的蛋白表达。结果:随着肿节风浓度的升高,A549、H1299细胞的增殖抑制率均上升;肿节风诱导细胞24h后,G0/G1期细胞比例升高,S期细胞比例下降,说明肿节风能促进肺癌细胞发生G0/G1期阻滞;Western blot结果表明,肿节风可通过上调pSmad3的表达来上调p21的表达。结论:肿节风通过TGF-β信号通路诱导细胞周期蛋白激酶抑制剂p21的表达,使细胞周期阻滞在G0/G1期,从而抑制肺癌细胞的增殖。
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