【摘 要】
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将扩增得到的PPV SC-1株VP2基因产物插入真核表达载体pPI-2.EGFP中,得到了重组质粒pPI-2.EGFP.VP2。再以含有PCV2 SC株全基因组的重组质粒pMD-PCV为模板扩增PCV2 ORF2基因,进一步
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将扩增得到的PPV SC-1株VP2基因产物插入真核表达载体pPI-2.EGFP中,得到了重组质粒pPI-2.EGFP.VP2。再以含有PCV2 SC株全基因组的重组质粒pMD-PCV为模板扩增PCV2 ORF2基因,进一步将其插入pPI-2.EGFP.VP2中,构建含有PPV VP2基因、PCV2 ORF2基因及EGFP报告基因的真核表达载体pPI-2.EGFP.VP2.ORF2。用脂质体介导法将pPI-2.EGFP.VP2.ORF2 DNA转染哺乳动物细胞Vero细胞,观察到了绿色荧光蛋白的融合表达,再将绿色荧光明显的Vero细胞制备电镜样品,观察到了PPV VP2形成的VLPs。将pPI-2.EGFP.VP2.ORF2 DNA免疫健康仔猪,并检测血中T淋巴细胞的动态变化,以及血清中PPV、PCV2抗体变化。结果显示:免疫仔猪的CD3+、CD4+ T淋巴细胞在外周血淋巴细胞中的比率均有一定程度的升高;而CD8+ T淋巴细胞在免疫后7-14d时有所下降,之后再升高。同时从血清中检测出较高水平的PPV、PCV2特异性抗体。这说明pPI-2.EGFP.VP2.ORF2转染后形成的PPV VP2基因重组PCV2 ORF2基因病毒样颗粒具有良好的免疫原性。同时本实验构建的pPI-2.EGFP.VP2.ORF2质粒载体中,含有伪狂犬病毒非必需基因区gI片段,可与伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)发生同源重组,进而构建PRV-PPV-PCV2三联基因工程疫苗。
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