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目的:研究五味子提取物对电离辐射所致小鼠免疫功能损伤的保护作用,分析其对小鼠胸腺组织细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响,探讨五味子提取物防治小鼠电离辐射所致免疫功能损伤的作用机制。
方法:1、将48只清洁级BALB/c小鼠,体重14~16g,雌雄各半,随机分为3组,即五味子(Schisandra Chinensis,SC)预防治疗组(五味子灌胃+照射),生理盐水组(NS+照射)和正常对照组(不照射),每组16只。五味子预防治疗组(SC)小鼠每天给予五味子提取物(4g/kg体重)灌胃,每天一次,连续7天;正常对照组(Normal control)及生理盐水组(NS)组均给予等量的生理盐水灌胃,每天一次,连续7天,灌胃后禁食水30分钟。最后一次给药结束后1h给予60Co-γ线照射。
2、用血细胞计数仪检测小鼠外周血白细胞总数及分类变化,用流式细胞术检测经60Co-γ线照射24h后小鼠外周血中CD3+、CD4+、CD8+T细胞的值,用免疫浊度法检测小鼠血清IgG及补体C3的含量。
3、采用Gimsa染色显微镜观察胸腺组织细胞形态学,流式细胞术检测各组小鼠胸腺组织细胞凋亡率的变化。
4、通过半定量RT-PCR法检测各组小鼠胸腺组织bcl-2和Fas mRNA表达的变化。
5、免疫组化染色法检测各组小鼠胸腺组织bcl-2和Fas蛋白表达的变化。
结果:1、与正常组小鼠相比,经60Co-γ射线照射24h后,NS对照组小鼠外周血白细胞总数和淋巴细胞数量均明显下降(P<0.01);SC预防治疗组小鼠较NS对照组小鼠外周血白细胞总数和淋巴细胞数量均明显升高(P<0.01);SC预防治疗组与正常组小鼠外周血白细胞总数和淋巴细胞数量比较无显著性差异(P>0.05)。
2、与正常对照组相比,NS对照组小鼠外周血中CD3+、CD4+和CD8+T细胞值、IgG及补体C3水平明显降低(P<0.01); SC预防治疗组小鼠较NS组小鼠外周血中CD3+、CD4+和CD8+T细胞值、IgG及补体C3水平均明显升高(P<0.01),但与正常组小鼠比较,无显著性差异(P>0.05)。
3、与正常组相比,经60Co-γ射线照射24h后,NS对照组小鼠胸腺细胞明显减少,胸腺细胞凋亡率升高(正常组和NS对照组的细胞凋亡率分别为21.32±2.56%和1.98±0.21%),P<0.01; SC预防治疗组较NS组小鼠胸腺细胞增多,胸腺细胞凋亡率降低(SC预防治疗组和NS组的细胞凋亡率分别为2.87±1.03%和21.32±2.56%),P<0.01,但与正常组小鼠比较,无显著性差异(P>0.05)。
4、经60Co-γ射线照射24h后,NS对照组小鼠胸腺组织bcl-2 mRNA表达水平较正常组小鼠明显降低,Fas mRNA表达水平明显升高(P<0.01);SC预防治疗组较NS组小鼠胸腺组织bcl-2 mRN表达水平明显升高,Fas mRN表达水平降低(P<0.01)。
5、经60Co-γ射线照射24h后,NS对照组小鼠胸腺组织bcl-2蛋白表达水平较正常组明显降低,Fas表达水平明显升高(P<0.01); SC预防治疗组较NS组小鼠胸腺组织bcl-2蛋白表达水平明显升高,Fas表达水平明显降低(P<0.01)。
结论:1、五味子提取物对60Co-γ辐射所致小鼠免疫损伤有预防作用。
2、五味子提取物可抑制60Co-γ辐射所致的小鼠胸腺细胞凋亡。
3、五味子提取物可能通过升高小鼠胸腺细胞凋亡抑制基因Bcl-2的表达,降低Fas的表达降低,发挥防治60Co-γ辐射所致小鼠胸腺细胞凋亡的作用。