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葡萄糖氧化酶(Glucose Oxidase),简称GOD,是一种需氧脱氢酶,能够催化葡萄糖生成葡萄糖酸和过氧化氢。本研究以一株产葡萄糖氧化酶毕赤酵母基因工程菌P. pastor is p51为研究菌株,研究了该菌株在摇瓶和发酵罐控制条件下的发酵条件和培养基,菌种的保藏条件,还研究了一种利用GOD在去除发酵液中的葡萄糖后用直接滴定法检测氨基葡萄糖的方法。具体如下：(1)摇瓶条件下：YEPD为种子培养基时最佳种龄为20h; BSM为基础发酵培养基时的最佳氮源为磷酸氢二铵；正交试验法优化葡萄糖氧化酶发酵最佳培养基如下：葡萄糖(20g/L)、磷酸氢二铵(5g/L)、硫酸钙(0.45g/L)、硫酸钾(9.1 g/L)、硫酸镁(14.9g/L)、PTM1 (3.3 mL/L), KOH 4.13g/L,磷酸26.7mL/L。培养条件：发酵温度31℃、初始pH值6.0、摇床转速250r/min、装液量10%、甲醇最大浓度2.5%和最佳发酵时间8d。摇瓶发酵的的产酶水平达到了30U/mL。(2)蒸馏水法保藏毕赤酵母基因工程菌,保藏六个月内存活率为98%高于斜面法的45%。蒸馏水法和斜面保藏法保藏菌种进行发酵,葡萄糖氧化酶活力分别为22.5±0.5U/mL和23±0.4U/mL,经过T检验分析,两种菌种保藏方法对发酵结果没有显著性差异。(3)5L发酵罐的培养条件下,诱导起始的生物量为90g/L、诱导pH5.0、采用恒速流加甲醇流量8ml/h/L,培养130h酶活最高230 U/mL。10L发酵罐采用三级发酵工艺发酵11 1h,酶活达到260U/mL。(4)用GOD催化样品发酵液中的葡萄糖变成葡萄糖酸,使之失去了氧化费林试剂的能力,后用直接滴定法滴定氨基葡萄糖,此法和比色法的换算关系为滴定法测定值=(连续分光光度法测定值+0.1654)×1.0868+0.3793,在测定发酵液中的氨基葡萄糖时发现,此法不受发酵液中色素的影响,较比色法更加准确。