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积雪草苷是从传统中草药伞形植物积雪草中提取出来的有效物质,它通过抑制Fb增殖,控制结缔组织的基质和纤维成分的过度增生,减少HS中TGF-β的水平,发挥抑制瘢痕增生的作用.HS中TGF-β 1与TGF-β 2含量增高,与正常皮肤中的Fb相比,体外培养的HSFb对TGF-β的反应性更高,Smad是TGF-β的下游信号蛋白,因此我们推测Smad信号通路在细胞内异常持续激活,和/或细胞内抑制作用减弱是其原因.磷酸化Smad2和Smad7是细胞内两种重要的作用相反的信号介导子,且磷酸化是Smad2活化形式.目的:1、HSFb中TGF-β/Smads信号通路中的Smad2、7信号介导子的表达及调控,探讨HS中是否存在TGF-β/Smads信号通路的异常.2、观察积雪草苷对HSFb中TGF-β/Smads信号通路中smad2、Smad7表达的影响,探讨其抑制瘢痕增生的作用是否与此有关.方法:1、实验第一部分:Fb的培养.取术中切除的HS组织6例,瘢痕增生的时间在3个月~8个月,经HE及Masson染色证实为增生性瘢痕.6例健康人的正常皮肤标本为对照.以组织块法进行人HS和NFb的原代培养,取第2-4代用于实验.2、实验第二部分:HSFb中TGF-β/Smads信号通路的表达及调控.将5ng/ml浓度的TGF-β 1作用于HS及NFb,分别在0,30分钟,1小时,2小时,4小时及24小时进行如下检测.①应用免疫细胞化学检测磷酸化Smad2和Smad7在细胞内的定位.②RT-PCR检测Smad2和Smad7 mRNA的表达水平.③Western Blot测定磷酸化Smad2和Smad7的蛋白表达量.比较静息及加入TGF-β 1后各时间点之间,各项指标在HS与NFb之间的差异,P<0.05认为差异有统计学意义.3、实验的第三部分:积雪草苷对HSFb中TGF-β/Smads信号通路的影响将积雪草苷加入HSFb中48小时后,在加药前后应用以下方法进行检测.①流式细胞仪检测细胞周期及凋亡②应用免疫细胞化学检测磷酸化Smad2和Smad7在细胞内的定位.③RT-PCR检测Smad2和Smad7 mRNA的表达水平.④Western Blot测定磷酸化Smad2和Smad7的蛋白表达量.比较加药前后各项指标之间的差异,P<0.05认为差异有统计学意义.