目的:通过药效学的系统比较,探明青翘与老翘的功效差异。并对青翘与老翘水煎液进行血清药物化学分析,观察其体内入血成分的差异。方法:选取山西道地产青翘和老翘,以传统用药方式水提取物作为被试物展开相关实验。1、采用经典动物模型比较青翘与老翘抗炎、抗内毒素、发汗、保肝作用的差异,并以经典方剂连翘散治疗疮疡肿毒实验和银翘散治疗急性肺损伤实验进一步验证两者的功效差异。2、采用系统溶剂法将青翘水煎液分为石油醚层、乙酸乙酯层、正丁醇层、水层四个不同的极性部位,进一步筛选青翘抗炎作用的有效部位。并采用核磁(1H-NMR)代谢组学技术初步探讨给药后血清代谢物变化规律。3、运用血清药物化学技术,分别建立青翘与老翘水煎液体内外HPLC指纹图谱,以及青翘与老翘抗炎作用的血浆HPLC指纹图谱,比较两者之间的差异,并分析和表征青翘与老翘水煎液的血中移行成分。结果:1、药效系统比较(1)在抗炎作用方面:青翘水煎液与老翘水煎液均可抑制二甲苯所致小鼠的耳廓肿胀,但青翘抗急性炎症的作用(P<0.01)优于老翘(P<0.05);在慢性炎症模型中,青翘水煎液组、老翘水煎液组均有明显的抑制大鼠琼脂肉芽肿的作用(P<0.05),两者相比无显著性差异(P>0.05)。(2)在抗内毒素作用方面:体外抗内毒素时,青翘的浓度为1.0g/ml时,老翘浓度为1.5g/ml时有抗内毒素的作用,说明青翘体外抗内毒素作用优于老翘;内毒素致热实验中,与模型组比较,青翘组在5.5h后,老翘组在6.5h后解热作用明显(P<0.05),青翘发挥解热作用比老翘起效快;但青翘与老翘相比,二者解热作用无明显差异。(3)在发汗作用方面:与空白组比较,青翘水煎液组有明显的发汗作用(P<0.05),老翘水煎液组无明显发汗作用(P>0.05);与老翘组比较,青翘水煎液组发汗作用明显,差异有统计学意义(P<0.05),说明青翘发汗作用优于老翘。同时发现青翘挥发油组也有明显的发汗作用,说明青翘挥发油可能是青翘发汗的物质基础之一。(4)在保肝作用方面:与模型组相比,老翘水煎液组和老翘醇提液组能明显降低谷丙转氨酶活性,青翘水煎液组和青翘醇提液组降低谷丙转氨酶活性的作用不明显;但随着剂量的增加,青翘和老翘均可明显降低谷丙转氨酶活性。(5)复方验证:(1)连翘散治疗疮疡肿毒实验,发现青翘抑制豚鼠急性疮疡伤口的红肿、分泌物作用较老翘起效快。其改善疮疡皮肤病理组织优于老翘,而连翘散(老翘)组皮肤病理改善优于连翘散(青翘)组。(2)银翘散治疗急性肺损伤实验,与模型组相比,银翘散(青翘)组TNF-α的水平显著降低(P<0.01),IL-6、IL-1β的水平明显降低(P<0.05);银翘散(老翘)组IL-6、TNF-α的水平明显降低(P<0.05),而IL-1β的水平与模型组相比未见明显差异(P>0.05);银翘散(青翘)组三个炎症因子的水平均低于银翘散(老翘)组,但两者的差异无统计学意义。2、青翘抗炎作用有效部位筛选(1)与模型组相比,青翘水煎液组TNF-α、IL-1β的含量明显降低(P<0.05);其中乙酸乙酯组IL-6、TNF-α、IL-1β的水平明显降低(P<0.05);正丁醇组只有TNF-α的含量明显降低;水层组各炎症因子均无明显变化。(2)采用无监督的判别模式PCA,对各给药组大鼠血清核磁图谱进行分析,发现青翘水煎液和乙酸乙酯部位对吸入内毒素的炎症模型大鼠有向空白组调节的趋势,发挥了一定的抗炎作用,而正丁醇部位无明显作用,并确认了13个与青翘发挥抗炎作用相关的差异代谢物。3、青翘与老翘血清药物化学研究研究表明,青翘模型组入血成分个数和部分成分的含量明显高于老翘模型组。青翘急性肺损伤模型组血浆中有28个移行成分,明显多于青翘正常组的17个移行成分,部分成分的含量也高于青翘正常组血浆;老翘模型组和正常组血浆移行成分基本一致。研究还发现口服给药后连翘酯苷A、B,连翘苷,芦丁吸收率较低,入血的量很少,而连翘脂素、槲皮素入血后的相对含量明显提高,这可能与连翘苷、芦丁等成分被肠道菌群代谢成连翘脂素和槲皮素有关。结论:药效学系统比较表明青翘抗炎、体外抗内毒素、发汗等作用方面均优于老翘,青翘发挥解热作用比老翘起效快。老翘降低谷丙转氨酶活性的作用优于青翘,随着剂量的增加,青翘和老翘降低谷丙转氨酶活性的作用无明显差异。复方验证实验进一步明确了青翘的抗炎作用优于老翘,同时发现青翘抑制红肿和分泌物作用较老翘起效快。血清药物化学实验发现在急性肺损伤模型大鼠血清中,青翘与老翘入血成分存在差异,而在正常大鼠血清中,青翘和老翘入血成分差异不明显,研究还发现连翘脂素、槲皮素是青翘发挥抗炎作用的物质基础。有效部位筛选实验发现乙酸乙酯部位是青翘抗炎的有效部位,且连翘脂素和槲皮素多富集于此部位,其主要通过调节肌酸、甘油磷酸胆碱、琥珀酸和氧化三甲胺4个主要的生物标志物来发挥抗炎作用。