论文部分内容阅读
本论文采用蒸馏水和稀碱溶液依次提取肠浒苔水溶性多糖,通过不同方法对两种粗多糖进行分级,研究多糖的化学结构、抗肿瘤和免疫活性,并探讨多糖的结构与生物活性的关系。用95%的乙醇回流后,用蒸馏水以浸提比为1:20提取多糖,常规干燥后得到肠浒苔水溶性粗多糖WE;残渣洗净、干燥后,用0.5 M NaOH室温下提取,盐酸中和,离心,常规干燥后得碱提水溶性粗多糖AE。WE经冻融分级、脱蛋白、离子交换层析和分子筛凝胶层析纯化后得到中性糖WEA和酸性糖WEB;AE经冻融分级、脱蛋白、超滤分级和分子筛凝胶层析后得到DAEA(过膜部分)和DAEB(膜上部分)。HPLC检测WEA、WEB、DAEA和DAEB均为单一峰,平均分子量分别为72.03kDa、60.12kDa、18.21kDa和46.80kDa。GC分析、间羟联苯法及离子色谱检测表明(摩尔百分含量,以下同):WE中含有鼠李糖(58.00%)、葡萄糖(20.25%)、木糖(13.54%)、半乳糖(2.27%)、甘露糖(2.26%)和葡萄糖醛酸(3.43%);WEA含有葡萄糖(55.24%)、鼠李糖(23.76%)、木糖(17.11%)、甘露糖(2.21%)及半乳糖(1.67%);WEB含有鼠李糖(68.81%)、木糖(9.40%)、半乳糖(4.89%)和葡萄糖醛酸(16.89%),硫酸根19.98%。AE含有鼠李糖(15.93%)、甘露糖(18.04%)、半乳糖(13.09%)、葡萄糖(11.96%)阿拉伯糖(10.94%)、核糖(8.89%)、木糖(5.29%)和葡萄糖醛酸(15.86%);DAEA含有葡萄糖(33.69%)、鼠李糖(11.44%)、半乳糖(9.64%)、甘露糖(7.92%)、木糖(2.79%)、阿拉伯糖(7.58%)和葡萄糖醛酸(29.65%);DAEB含有鼠李糖(69.20%)、木糖(12.90%)、葡萄糖(8.20%)、半乳糖(7.40%)及葡萄糖醛酸(2.30%),硫酸根9.6%。对肠浒苔多糖各级分免疫活性研究表明:WE、WEA、WEB、AE和DAEB能够增强淋巴细胞的增殖和腹腔巨噬细胞的吞噬作用,促进巨噬细胞分泌NO,增强诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性,促进肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌。其中水提多糖中WEB的免疫活性优于WEA和WE;碱提多糖中DAEB的免疫活性优于AE,而DAEA活性不明显。对肠浒苔多糖各级分进行体外抗肿瘤实验研究表明:WE、WEA、WEB、AE、DAEA及DAEB对S 180、Hela、HepG2细胞均没有抑制作用。根据上述结果,选择WEA、WEB和DAEB进行抗肿瘤实验研究。结果表明:WEA、WEB和DAEB均能抑制小鼠体内移植性肿瘤S180的生长。WEB抗肿瘤活性优于WEA和DAEB,WEB在400 mg/kg时抑瘤率最高,为74.57%。并且WEA、WEB和DAEB均能增加荷瘤小鼠的相对脾重和相对胸腺重,增加血清中TNF-α的含量。采用部分酸水解、高碘酸氧化、Smith降解、甲基化及IR、GC、GC-MS、13C-NMR等方法对WEB和DAEB进行结构分析。WEBD和WEBD-R甲基化结果比较表明WEB中Rha以(1→4)键型为主,还有(1→2),(1→2,4)、(1→4)、和(1→3)连接键型;Xyl和Gal的连接键型均为(1→),同时含有(1→4)-GlcA及少量(1→)-GlcA;该糖中每5个(1→4)-Rha中就有一个分支,分支点在O-2。通过WEB和WEBD的13C-NMR结果比较发现,WEB中硫酸根位于鼠李糖的O-3。DAEB甲基化分析结果表明DAEB由(1→)、(1→4)、(1→2,4)-Rha;(1→)、(1→2,3)、(1→3)-Xyl;(1→4)-Glc及(1→3)-Gal组成;每6个(1→4)-Rha中就有一个分支,分支点在O-2。另外,通过对DAEB和DAEB-D的甲基化结果比较表明,大部分硫酸根位于(1→4)-Rha的O-3,还有一少部分硫酸根位于(1→3)-Xyl的O-2位。最后,本论文检测了硫酸根离子对WEB免疫活性的影响。结果表明,WEBD对淋巴细胞转化的促进作用,以及对巨噬细胞的激活作用明显减弱。可见,硫酸根与酸性多糖WEB的免疫活性密切相关。