该研究中,我们首先将巢式甲基化特异性PCR(nMSP)用于甲基化检测,并检测了不同类型标本中p16基因的过甲基化,与普通的MSP法相比,nMSP法检测的灵敏度、特异性显著提高.同时,我们还建立了一种基于错配杂交、增强化学发光检测的甲基化定量检测方法,并应用新的甲基化定量方法检测了非小细胞肺癌患者的外周血血清中p16基因的甲基化状态,探讨了p16基因的异常甲基化在肿瘤的早期诊断中的应用.学位论文共分四部分:一.巢式甲基化特异性PCR(nMSP)检测不同类型标本中p16基因的过甲基化利用巢式甲基化特异性PCR(nMSP)检测了肿瘤患者血清、肿瘤组织及石蜡包埋组织中p16基因的甲基化状态.nMSP法采用两步扩增,显著提高了检测的灵敏度、特异性.二.建立一种基于错配杂交、增强化学发光的甲基化定量检测方法该文建立了一种基于错配杂交和化学发光的p16基因启动子区过甲基化的定量检测方法.三.肿瘤细胞的转录失活与p16基因的过甲基化关系研究p16基因的转录失活与它的启动子过甲基化之间存在非常密切的联系,为了研究p16基因过甲基化对转录的抑制作用,我们分别用nMSP法以及新建立的甲基化定量检测方法分析了四株肿瘤细胞(人移行膀胱癌细胞株T-24、人肺腺癌细胞株SPC-A1、人移行膀胱癌细胞株BIU-87、人肝母细胞瘤细胞株Hep-G2)在用脱甲基化试剂5-氮胞苷(5-Aza-CdR)处理前后p16基因的甲基化程度的改变,并且同时用RT-PCR方法检测了处理前后p16基因的转录表达水平.结果显示处理前后,除人移行膀胱癌细胞株BIU-87外,其它三株细胞的p16基因的甲基化程度与它的转录水平呈逆相关.进一步的研究显示BIU-87细胞的p16基因可能缺失.四.定量检测非小细胞肺癌病人血清中p16基因的甲基化;该研究建立了DNA甲基化的定量检测方法,该方法可广泛用于肿瘤治疗效果的评价、预后观察、肿瘤复发的监测、高危人群的筛查以及其它的甲基化有关的实验研究.