【摘 要】
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目的:探讨去甲基化剂5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对胰腺癌BxPC-3细胞miR-148a表达水平、CpG岛甲基化状态及细胞增殖的影响。方法:DMEM培养基常规培养胰腺癌BxPC-3细胞,实验分2组,实
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目的:探讨去甲基化剂5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对胰腺癌BxPC-3细胞miR-148a表达水平、CpG岛甲基化状态及细胞增殖的影响。方法:DMEM培养基常规培养胰腺癌BxPC-3细胞,实验分2组,实验组培养基中加入终浓度5μmol/L的5-Aza-CdR、对照组加入等体积PBS培养,培养72h时收集细胞。实时定量荧光PCR(RT-qPCR)法检测细胞miR-148a表达水平;应用甲基化特异性PCR(MSP)法检测细胞miR-148a基因启动子区CpG岛甲基化状态;四甲基偶氮唑盐比色分析法(MTT)检测细胞体外增殖活力。结果:(1)实验组miR-148a相对表达量为对照组2.93±0.11倍,与对照组相比实验组miR-148a表达水平明显上调(P<0.01);(2)实验组miR-148a基因启动子CpG岛甲基化阴性,而对照组miR-148a基因启动子CpG岛甲基化阳性;(3)实验组细胞24h、48h、72h、96h及120h时间点体外增殖活力均低于对照组,生长抑制率分别为2.36%、5.55%、15.63%、16.63%和18.90%,与对照组相比,实验组BxPC-3细胞体外增殖活力显著减慢(P<0.05)。结论:去甲基化剂5-Aza-CdR可致胰腺癌BxPC-3细胞miR-148a基因启动子区CpG岛去甲基化,从而显著上调miR-148a表达水平,并抑制胰腺癌BxPC-3细胞生长。提示miR-148a在胰腺癌中的表达受DNA甲基化调控,并起到“抑癌基因”的作用,其有望成为胰腺癌潜在的有效治疗靶点。
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