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ERK5、p38是MAPK家族中的重要成员,在生物体各项生命活动具有重要的作用。MAPK家族成员是一类在细胞内具有生物进化的高度保守性,并可以被多种细胞外信号所激活的丝／苏氨酸蛋白激酶。MAPKs除参与了胚胎发育、细胞分化、增殖和细胞死亡的过程外,还和肿瘤、炎症等疾病有关,同时MAPKs也是先天性免疫系统的重要组成部分。本实验室前期已经获得了文昌鱼ERK5(Amphi-ERK5). p38(Amphi-p38)基因序列。本文利用生物信息学方法分析并选择性克隆了部分抗原性较好的基因片段,插入载体制备蛋白表达载体,并利用表达的蛋白肽段诱导小鼠制备多克隆抗体；通过免疫组织化学方法对成体文昌鱼组织中的Amphi-ERK5、Amphi-p38蛋白表达情况进行了检测；与此同时,为了验证本实验室制备的Amphi-ERK5、 Amphi-p38抗体免疫组化结果的可信度,利用购买的ERK5、p38异源性抗体对成体文昌鱼组织中的Amphi-ERK5、Amphi-p38蛋白表达进行了检测。本研究为进一步研究Amphi-ERK5、Amphi-p38蛋白的功能提供了一系列实验依据。本研究构建的Amphi-ERK、Amphi-p38表达载体,是利用pet-29b(+)为表达载体,BL21(DE3)为表达菌株,通过原核表达的方法获得目的蛋白。鼠抗文昌鱼多克隆抗体的制备分别以两种方法：1)制备Amphi-ERK5抗体,采用切胶纯化后的文昌鱼ERK5原核表达蛋白肽段为免疫原,免疫小鼠,利用Amphi-ERK5原核表达蛋白肽段做VVestern blotting,检测证明多克隆抗体制备成功后,获取抗血清。2)制备Amphi-p38抗体,采用过柱纯化并经透析复性的文昌鱼p38原核表达蛋白肽段为免疫原,免疫小鼠,利用Amphi-p38原核表达蛋白肽段做Western blotting,检测证明多克隆抗体制备成功后,获取抗血清。利用自制的Amphi-ERK5抗体进行免疫组织化学检测发现,Amphi-ERK5在成体文昌鱼的表皮、肠、生殖腺、肝盲囊、咽鳃区有强烈的表达信号,而在脊索、肌肉中未见表达信号。利用羊抗人ERK5抗体重复上述实验,也出现相一致的结果。利用自制的Amphi-p38抗体进行免疫组织化学检测发现,Amphi-p38在成体文昌鱼的表皮、肠、生殖腺、肝盲囊、咽鳃区均有强烈的表达信号,在肌肉中有较弱的表达信号,在脊索中未见表达信号。利用鼠抗人p38抗体对文昌鱼组织进行免疫组化检测,显示组织中p38蛋白表达结果与上述结果一致。