论文部分内容阅读
目的研究大鼠肺纤维化发生发展中MMP1、MMP3、TIMP1及miR-29a的表达变化和作用,并且探讨活性维生素D3[1,25(OH)2D3]处理在大鼠肺纤维化发生发展中的作用及对这些基因表达的影响。方法150只雄性SD大鼠随机分为预防组和治疗组,预防组分为模型组Ⅰ、给药组Ⅰ和对照组Ⅰ,治疗组分为模型组Ⅱ、给药组Ⅱ和对照组Ⅱ。模型组和给药组经气管注入博来霉素,对照组经气管注入生理盐水。预防组和治疗组分别于术后第2d和14d腹腔注射给药,其中给药组给予活性维生素D3,模型组给予活性维生素D3溶剂,对照组给予生理盐水。预防组的各组分别于术后第14d、21d和28d处死大鼠取材,治疗组的各组分别于术后第21d和28d处死大鼠取材。取大鼠肺组织,用HE染色、Masson染色观察各组实验大鼠肺组织结构和胶原纤维的差异,用碱水解法检测羟脯氨酸含量的变化,用实时定量PCR检测组织中α-SMA、Col Ⅰ、TIMP1 mRNA及miR-29a的相对表达量,用免疫组织化学方法检测组织中α-SMA、Col Ⅰ、MMP1、MMP3和TIMP1蛋白质表达水平,并经图像分析进行量化。结果博来霉素处理后,第14d大鼠肺部已经出现纤维化,随着时间推移,纤维化进一步加重。模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ中的羟脯氨酸含量、α-SMA、Col Ⅰ、MMP1、MMP3和TIMP1的表达都明显高于相同时间点对照组Ⅰ/Ⅱ中的表达(p<0.05),而其miR-29a的表达与相应的对照组Ⅰ/Ⅱ相比则明显减少(p<0.05)。在预防组中,与模型组Ⅰ相比,给药组Ⅰ在三个时间点羟脯氨酸含量、α-SMA和Col Ⅰ的mRNA和蛋白质表达都显著降低(p<0.05),但在治疗组中,给药组Ⅱ中羟脯氨酸含量、(α-SMA和Col Ⅰ的mRNA和蛋白质表达比模型组Ⅱ虽有所降低,但并无显著性差异(p>0.05)。但给药组Ⅰ/Ⅱ 中MMP1、MMP3和TIMP1的表达均低于相应时间点的模型组Ⅰ/Ⅱ的表达(p<0.05),给药组Ⅰ/Ⅱ中miR-29a的表达与相同时间点模型组Ⅰ/Ⅱ相比则有所增加(p<0.05)。结论MMP1、MMP3、TIMP1和miR-29a在大鼠肺纤维化发生发展中具有重要作用。并且活性维生素D3对大鼠肺纤维化的发生发展具有一定的抑制作用,其预防效果更好一些,活性维生素D3能促进miR-29a表达,抑制MMP1、MMP3、TIMP1的表达,可能是通过miR-29a调节包括MMP1、MMP3、TIMP1在内的多种靶基因来发挥抑制纤维化的作用。