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目的本研究采用改进Feeney’s自由落体打击法制作创伤性脑损伤大鼠模型,检测外伤后大鼠脑组织中内皮抑素(ES)、血管内皮生长因子(VEGF)及其受体-2(FLK-1)的表达水平,探讨它们与微血管面密度(MVD)以及脑组织含水量动态改变之间的关系,从而进一步阐明外伤后脑水肿的病理生理机制,并且为有效诱导缺血区血管再生,改善局部血液供应,促进神经血管结构重塑和功能修复提供新的思路和方法。方法1.创伤性脑损伤动物模型的制备与脑组织含水量的测定将60只Wistar大鼠随机分组为外伤组和对照组,各组分别按照6h、12h、1d、3d、7d、14d不同处死时间点再分为个6亚组,每亚组5只。参照改进的Feeney’s自由落体打击法制作创伤性脑损伤的动物模型,应用改良的mNSS神经功能损伤评分系统,依据伤后大鼠的平衡能力、翻身、支头、行走、逃避及四肢反应等方面,对其行为进行神经功能损伤评分,并通过与对照组比较,评价自由落体打击法制作的创伤性脑损伤模型的可靠性。采用干湿称重法检测受损脑组织的含水量变化,观察外伤后脑水肿的进展过程。2.创伤性脑损伤后血管再生调节因子的表达与微血管动态变化的相关性研究在上述实验的基础上,采用免疫组织化学法检测大鼠损伤灶周围皮层及海马区脑组织中ES、VEGF及FLK-1的表达,用CD34标记损伤灶周围血管内皮细胞以计数MVD,并应用Media Cyberretics Image ProPlus6.0图像分析系统计算微血管面密度,并通过分析各项指标表达的时相规律,探讨它们在创伤性脑损伤过程中的相互关系。3.统计学处理应用SPSS13.0软件,计量资料以均数士标准差(x±s)表示,组间比较采用独立样本t检验,组内比较采用单向方差分析,相关性分析采用双变量相关性分析,P<0.05为具有统计学意义,所有检验之前均行方差齐性检验。结果1.成功制备创伤性脑损伤的动物模型脑外伤动物模型采用改进的Feeney’s自由落体打击法制作的创伤性脑损伤动物模型,与对照组相比,其行为学发生的改变包括：大鼠呼吸较对照组深长,脑外伤对侧肢体运动障碍,本体感觉及反射能力降低,平衡能力明显下降。6h组各只动物均不能保持平衡,至少有一只爪从横梁上掉下,不能直线行走,逃避及四肢对疼痛反应明显迟钝。根据改良的mNSS神经功能损伤评分,动物的总体评分较对照组升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。12h组动物神经功能损伤继续加重,总体评分较6h组上升。1-3d组动物总体评分达峰,平衡木试验中动物试图平衡但于20-40s之间跌落。7d组动物对疼痛反应较前逐渐敏感,但是仍存在运动功能障碍。14d组动物各项指标基本恢复正常,神经功能损伤评分与对照组相比,差异仍具有统计学意义(P<0.01)。2.大鼠神经功能损伤评分与脑组织含水量及微血管动态变化的相关性脑组织含水量外伤组动物受损脑组织的含水量在外伤后6h开始升高,与对照组相比较,差异具有统计学意义(P0.05)。1d为水肿高峰期,持续至3d开始逐渐下降,14d恢复正常,与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。微血管面密度损伤灶周围皮层及海马区脑组织的MVD于伤后6h即刻下降,与对照组相比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。此后差异逐渐增大,3d组MVD开始增加,但仍低于对照组(P<0.01)。升至7d达峰,14d组MVD降至基本正常。统计分析显示,创伤性脑损伤后大鼠神经功能损伤评分与受损脑组织的含水量呈正相关(r=0.741,p<0.01),后者的动态变化与MVD及微血管的功能状态改变密切相关。3.创伤性脑损伤后血管再生调节因子的表达规律血管再生由内源性血管再生调节因子——血管再生因子和血管再生抑制因子共同参与调控。大鼠损伤灶周围皮层及海马区脑组织中脑外伤后1d内未检测到ES明显的表达变化,伤后3-14d ES的表达水平持续升高(P<0.01)。伤后各时间点VEGF阳性细胞数与对照组相比均升高,1-3d阳性表达最强,7d开始降低(P<0.05)。创伤性脑损伤后1d内VEGF的受体FLK-1的含量无明显变化,伤后3d FLK-1表达明显升高,第7d达最高峰,14d FLK-1虽高于正常水平,但较正常组差异无显著性(P<0.05)。4.ES、VEGF、FLK-1表达与微血管动态变化的相关性数据表明：创伤性脑损伤后损伤灶周围脑组织中MVD与ES、VEGF的表达无明显相关性(P>0.05),脑外伤1d后MVD与FLK-1的表达水平同步变化,且呈正相关(r=0.679,P<0.05)。结论1.自由落体打击法制作的创伤性脑损伤动物模型,能够成功模拟临床上加速性暴力所致的外伤后脑水肿的病理生理过程,符合本研究的要求。2.创伤性脑损伤后微血管的动态改变直接影响着脑水肿的程度,继而决定着相应时期的神经功能状态。3.脑外伤后ES、VEGF、FLK-1的动态平衡,共同调控微循环功能状态的改变,影响着继发性脑损伤的发生发展,是创伤性脑损伤过程的重要环节。