论文部分内容阅读
乙型肝炎病毒(HBV)是一种小的包膜病毒,其慢性感染会导致多种肝脏疾病包括肝炎、肝纤维化、乃至肝细胞癌。当前全球范围内有3.5亿人左右的慢性HBV携带者,其中约有1亿人位于中国。尽管当前已经有有效的HBV疫苗,慢性HBV感染依然是全球卫生医疗体系的重要负担。当前治疗HBV的主要药物为干扰素以及核苷类似物,但是这些方法有较强的副作用或者易产生耐药性,并且都不能够治愈慢性HBV感染或者说不能够从病人肝脏中清除HBV。所以,当前应该更加深入的研究HBV的复制以及病毒-宿主互作以促进开发新的抗HBV的治疗方法。HBV属于嗜肝病毒科(Hepadnaviridae),正嗜肝病毒属(orthorHepadnavirus),能够特异性的在人类的肝脏中复制,其复制受到多种宿主普遍存在的转录因子以及肝脏富集性转录因子的调控。肝脏富集的转录因子包括肝细胞核因子(HNFs), CCAAT/原件结合蛋白(C/EBPs),D位点结合蛋白(DBPs)等。其中,HNF1、 HNF3、 HNF4和C/EBPalpha已经被证明可以在转录或者转录后水平影响病毒的基因表达以及复制。在本研究中,我们证明了肝细胞核因子6(HNF6)能够抑制病毒的基因表达和DNA复制。在肝癌细胞系中过表达HNF6可以抑制HBV的分泌性抗原HBsAg、 HBeAg、以及病毒RNA的表达水平,同时HNF6还可以降低HBV复制中间体DNA的水平。通过shRNA下调HNF6的表达可以促进HBV的基因表达和复制。进一步的机制研究发现,HNF6可以抑制病毒SP2启动子活性从而导致HBsAg表达的下调。SP2启动子上的顺式元件(nt 3009-3019)对于HNF6抑制SP2启动子的作用是关键的。另一方面,我们还证明了HNF6可以在转录后水平影响病毒RNA的水平。深入研究发现,HNF6可以加速HBV前基因组RNA的降解,使其半衰期减少近3个小时,但是这种促进降解的作用并不依赖于La蛋白。另外HNF6抑制HBV RNA的作用主要发生在细胞核内。通过截短突变体实验证明了HNF6蛋白的N端是主要起到抗HBV作用的区域。最后,我们通过小鼠尾静脉高压注射模型证明了HNF6可以在体内抑制HBV的基因表达以及DNA复制。综上所述,本研究发现了HNF6可以通过转录以及转录后的机制来抑制HBV的复制。这一结果加深了我们对于HBV与宿主细胞相互作用以及HBV复制转录调控机制的理解。