蛋白质酪氨酸硝化，是一种普遍存在的蛋白质翻译后修饰，是机体在氮氧化物存在条件下氧化损伤的特殊形式。蛋白质硝化的同时，也会伴随蛋白质氧化。硝化和氧化作用能造成蛋白质结构以及功能的改变，已在许多生理和病理状态下检测到它们的存在。 本文采用蛋白免疫印迹法（Western blotting）、分光光度法（spectrophotometry）和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS-PAGE）对hemin-NaNO2-H2O2体系在五种生物化学和细胞生物学研究中常用的缓冲溶液：碳酸缓冲液（NaHCO3-CO2）、Tris-HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液（PBS）、柠檬酸（Citrate-Citric acid）和Hepes缓冲液中引起的蛋白质硝化和蛋白质氧化作用进行了比较，并测定其硝化作用和氧化作用与pH值的关系。实验结果表明，在五种缓冲溶液中，氯高铁血红素（hemin）均能够有效催化NO2--H2O2体系引起的牛血清白蛋白（BSA）的硝化和氧化，并且其导致的BSA硝化程度和氧化程度随pH值变化趋势相反：硝化程度随pH值的升高而降低；氧化程度随pH的升高而升高。在相同pH值（7.0）情况下，五种缓冲溶液中，BSA的硝化、氧化程度也有差异：Tris-HCl溶液中硝化作用最强，PBS、Citrate-Citric acid、NaHCO3-CO2缓冲体系次之，而在Hepes体系中硝化程度最弱。进一步研究表明，不同缓冲溶液可能通过对亚硝酸盐的氧化的抑制而降低硝化。NaHCO3-CO2和PBS缓冲溶液中氧化作用最强，Citrate-Citric acid溶液，Tris-HCl溶液次之，在Hepes溶液中氧化程度最小。 上述研究结果表明，不同缓冲溶液对hemin-NaNO2-H2O2引起的蛋白质硝化和氧化程度不同，酸性条件下有利于蛋白质酪氨酸硝化，而碱性条件有利于蛋白质氧化。 值得注意的是，Hepes缓冲溶液中，氧化和硝化程度均不高，提示在进行细胞或其他体外氧化实验时，尽量不要用Hepes作为缓冲剂，以免影响研究结果的正确性。