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本研究采用延边黄牛耳皮肤成纤维细胞作为供核细胞,探讨使用荧光(UV)辅助去核法对延边黄牛体细胞克隆效率的影响。探寻一种寻求一种操作简单、相对无损伤、去核效率高的去核方法,从而为体细胞核移植效率的提高打下基础,为产业化生产提供理论依据。试验结果: 1、比较5μg/mLHoechst333420 min、10 min、20 min、30 min,40 min对延边黄牛卵母细胞的染色效率。结果显示在染色效率上20 min、30 min、40 min的染色效率明显高于0 min和10 min。 2、荧光辅助去核法与挤压去核法对卵母细胞去核率进行比较。在去核准确率上,荧光辅助去核法达到了100%的去核率,挤压去核法显著低于荧光辅助去核法。 3、比较在10s、15s、20s、25s、30s的UV操作时间里卵裂率和囊胚发育率情况。结果显示:在卵裂率上UV照射时间10s组、15s组、20s组、25s组无差别,要优于UV照射时间为30s组。在囊胚发育率上10s组、15s组、20s组最高,25s组次之,30s组的囊胚发育率最低。 4、本试验比较荧光辅助去核法与挤压去核法对重组胚发育率的影响。同时以孤雌发育组为对照组,结果表明,5组卵裂率差异均不显著,但囊胚发育率上,对照组(孤雌发育组)最高,20 min染色去核组、30 min染色去核组和40 min染色去核组无明显差异,但明显高于挤压法去核组。 5、本实验是卵母细胞经过5μg/mLHoechst3334220 min的染色后,在UV照射小于20s下操作比较带下注核法和胞浆内注核法对卵母细胞卵裂率和囊胚发育率的影响。结果显示:带下注射法要优于胞浆内注核法。