论文部分内容阅读
麻疹是由麻疹病毒引起的以发热、出疹为特征的急性呼吸道传染病,该病传染性强,致死率高,是目前导致发展中国家儿童死亡的重要原因。20世纪60年代以来,麻疹疫苗开始广泛使用,使麻疹的发病率、死亡率大幅度降低,但据世界卫生组织(World Health Organization,WHO)统计,全球每年仍有超过2千万麻疹病例。WHO制定的全球控制与消除麻疹计划中,麻疹的实验室检测是麻疹监测的重要组成部分。本研究将逆转录环介导等温扩增技术(Reverse-transcriptase loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)与带防污染装置的横向流动试纸条检测技术(lateral flow dipstick,LFD)相结合,建立了一种麻疹病毒核酸快速检测的新方法。研究针对麻疹病毒血凝素基因设计6条RT-LAMP扩增引物与1条特异性检测探针,其中上游内引物与探针的5’端分别标记生物素(biotin)与异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC),进行带biotin标记的RT-LAMP反应,同时进行与FITC-探针的杂交,最后利用LFD对等温扩增产物完成可视化核酸试纸条检测。通过对检测体系的优化,建立的麻疹病毒RT-LAMP-LFD快速检测技术能在1 h内完成对样本的检测(包括核酸提取),方法检测敏感性与荧光RT-PCR方法相同,达到10个RNA copies/μL,同时与其他常见呼吸道传染病病毒无交叉反应,具有良好的检测特异性。收集494份疑似麻疹患者咽拭子标本,用本研究建立的RT-LAMP-LFD快速方法进行检测,同时与荧光RT-PCR法进行比较,结果显示两种方法对494份临床样本的检测结果无显著性差异。结果表明,本研究研发的麻疹病毒核酸RT-LAMP-LFD检测技术对疑似麻疹患者临床样本的检测速度快,而且灵敏度高、特异性好、操作简单、仪器依赖程度低,有望发展成为麻疹病毒核酸快速检测的有效手段。