集胞藻PCC 6803分泌氨基酸突变株的构建及培养条件优化

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集胞藻PCC6803是单细胞蓝藻,能进行光合自养生长,也能利用葡萄糖进行混养、异养生长,可利用硝酸盐和亚硝酸盐作为氮源。工业生产所释放的烟气中,氮氧化物(NOx)是形成雾霾的元凶之一。NOx可与水反应形成硝酸根和亚硝酸根,被蓝藻利用。基于此,本研究试图利用集胞藻PCC6803构建将硝酸盐转化为氨基酸的藻株,将来可用于工业废气的生物脱硝。  由于精氨酸含4个氮原子,本研究首先试图以集胞藻利用硝酸根合成精氨酸。对集胞藻精氨酸分解途径上4个酶的编码基因,即精氨酸脱氢酶(Slr0782)、精氨酸脱亚胺酶(Sl11336)、蓝藻颗粒体合成酶(CphA)以及碱性氨基酸转运体(BgtB)的基因,进行逐个敲除,获得了一突变株△H、二突变△M、三突变△CMH、四突变△BCMH藻株。接着在四突变的基础上对合成途径中的2个酶——精氨琥珀酸合成酶(ArgG)、精氨琥珀酸裂解酶(ArgH)基因进行过表达,得到了过表达株△BCMH/PrbcL-argGH。每OD值过表达株△BCMH/PrbcL-argG细胞的胞外精氨酸产量为0.34±0.052mg L-1OD730-1。  作者进一步检测了在混养条件下不同C/N比值对氨基酸产量的影响,发现在NaNO3和葡萄糖分别是12g L-1和7gL-1条件下,每OD值二突变株△MH细胞的胞外精氨酸和胞外总的氨基酸产量都达到最高,分别是13.19±0.821mg L-1OD730-1和77.5±1.58mg L-1OD730-1,胞外产酸速率达到52.05±1.61mg L-1d-1,硝酸盐消耗达到0.51±0.016g L-1d-1。与其他藻株相比,该藻株胞外总的氨基酸产量在不同糖浓度下都是最高的。本研究表明,敲除氨基酸转运体并不是分泌氨基酸的必要条件,调节发酵营养中的碳氮比可以大幅提高氨基酸产量,并使其分泌到发酵液中。
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