人参叶中抗癌活性成分和沙生蜡菊花中降脂活性成分研究

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人参(Panax ginseng C.A.Meyer)为五加科(Araliaceae)人参属植物,主要分布在中国东北部,是传统的名贵中药,具有广泛的药理活性,不仅能强身壮体,还能治疗多种疾病。人参中发挥药理活性的物质基础主要是达玛烷型人参皂苷,其具有抗疲劳、延缓衰老、抑制肿瘤细胞生长、调节中枢神经系统、调节机体免疫力、改善心脑血管供血不足等功效。为了寻找新的活性物质,本文对人参叶中的人参三醇组总皂苷提取物进行了化学成分研究,采用多种色谱方法(硅胶及ODS柱色谱等)分离得到14个化合物,通过理化常数、光谱数据分析以及化学方法鉴定了它们的结构,分别为20(R)-原人参三醇(20(R)-Protopanaxatriol,1),20(R)-Dammar-3β,6α,12β,20,25-pentol(2 ),Dammar-20(22),24-diene-3β,6α,12β-triol(3),20(S)-Dammar-25(26)-ene-3β,6α,12β,20,24(R)-pentol(4),3β,6α,12β-trihydroxy-22,23,24,25,26,27-hexanordammaran-20-one(5),人参皂苷Rh4(ginsenoside Rh4,6 ),20(R)-人参皂苷Rh1(20(R)-ginsenoside Rh1,7),20(S)-人参皂苷Rh1(20(S)-ginsenoside Rh1,8),3β,6α,12β-trihydroxy-22,23,24,25,26,27-hexanordammaran-20-one,6-O-β-D-glucopyranoside(9),20(R)-Dammar-3β,6α,12β,20,25-pentol,6-O-β-D-glucopyranoside(10),20(S)- Dammar-3β,6α,12β-triol-20,25-epoxy,6-O-β-D-glueopyranoside(11),20(R)-dammar-3β,6α,12β,20,25-pentol,6-O-(α-L-rhamnopyranosyl-(2→1)-O-β-D-glucopyranoside(12),20(R)-人参皂苷Rg2(20(R)-ginsenoside Rg2,13),20(S)-Dammar-24-ene,3β,6α,20-trihydroxy-12,23-epoxy,6,20-di-O-β-D-glucopyranoside(14)。其中化合物5,14为新化合物。同时,采用HPLC法对人参叶中二醇组总皂苷提取物转化为人参皂苷Rg3、Rh2后产物中的人参皂苷Rg3(R,S)、Rh2(R,S)同时检测的方法学进行了研究。在色谱条件为乙腈:水:磷酸(44:56:0.028)、检测波长:203 nm、流量:1.0ml/min、柱温:20℃的条件下,Rg3(R)、Rg3(S)、Rh2(R)、Rh2(S)能够达到很好的分离:对线性、仪器精密度、样品的重现性、稳定性进行了考察,结果表明上述方法能稳定、可靠、快速的检测出转化产物中人参皂苷Rg3(R,S)、Rh2(R,S)的含量;此方法的建立,为进一步新药研发中对于人参皂苷Rg3、Rh2质量标准的方法学确立奠定了基础,也为人参皂苷的药效学评价提供了可靠依据。肥胖病已成为日益严重的公众流行病,严重影响人们的健康和生活。目前,减肥药已成为研究热点,本课题组在前期对多种药用花的活性筛选中,发现沙生蜡菊花具有降脂的生物活性,故本论文对其化学成分和降脂活性进行了深入研究。沙生蜡菊(Helichrysum arenarium(L.)MOENCH)为菊科(Compositae)蜡菊属(Helichrysum Mill.)多年生草本植物。广泛分布于欧洲北部、中部、东南部、苏联和蒙古,在我国主要分布于新疆北部。沙生蜡菊在欧洲地区作为民间用药具有悠久的历史,主要作为利胆剂、利尿剂,并有驱毒的功效,花的汁液能够治疗消化系统疾病,如能刺激胃液分泌、调节胆汁分泌等。此外,还有抗炎的功效,用于治疗膀胱炎、关节炎、风湿病等症。文献报道其生物活性的物质基础是多酚类化合物,如黄酮类、酚酸等。论文主要包括两部分内容:化学成分研究和降脂活性研究。化学成分研究:为了明确沙生蜡菊花降脂活性的物质基础,对其化学成分进行了系统研究,通过硅胶柱色谱、ODS柱色谱、HPLC制备色谱从沙生蜡菊花的甲醇提取物中分离得到了68个化合物,并利用理化常数、光谱学手段(UV、IR、NMR、CD)以及化学方法鉴定了67个化合物的结构,分别为7-Hydroxy-5-methoxyphthalide-7-O-β-D-glucopyranoside(1),(2R,3R)-1-Phenyl-2,3-butanediol-2-O-β-D-glucopyranoside(2),Everlastoside A(3),5,7-Dihydroxyphthalide-7-O-β-D-glucopyranoside(4),东莨菪苷(Scopolin,5),丁香苷(Syringin,6),二氢丁香苷(Dihydrosyringin,7),Undulatoside A(8),(E)-4-Hydroxybenzalacetone-3-O-β-D-glucopyranoside(9),Tortoside B(10),(2R)-Helichrysin(11 ),(2S)-Helichrysin(12),4-Allyl-2-methoxyphenyl 6-O-β-D-apiofuranosyl-(1-6)-β-D-glucopyranoside(13 ),(2S)-柚皮素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷((2S)-Naringenin-7-O-β-D-glucopyranoside,14),山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Kaempferol-3-O-β-D-glucopyranoside,15),芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Apigenin-7-O-β-D-glucopyranoside,16),木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Luteolin-7-O-β-D-glucopyranoside,17),木犀草素-3′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Luteolin-3′-O-β-D-glucopyranoside,18),地衣酚-β-D-吡喃葡萄糖苷(Orcinol-β-D-glucopyranoside,19),腺嘌呤核苷(Adenosine,20);Everlastoside B(21),Lcariside F2(22),p-Methoxyphenylethanol-O-β-D-apiofuranosyl-(1-6)-β-D-glucopyranoside(23),3-Methylbutanol-1-O-β-D-apiofuranosyl-(1-6)-β-D-glucopyranoside(24),淫羊藿次苷D1(Icariside D1,25),苯乙醇-β-巢菜糖苷(Phenethanot-β-vicianoside,26),(2R,3R)-1-Phenl-2,3-bunediol-2-O-β-D-apiofuranosyl-(1-6)-β-D-glucopyranoside(27),3-(Z)-Hexenol-O-β-D-apiofuranosyl-(1-6)-β-D-glucopyranoside(28),(7R,8S)-Dihydrodehydrodiconiferyl alcohol-4-O-β-D-Glucopyranoside(29),槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Quercetin-3-O-β-D-glucopyranoside,30 ),Chalonaringenin-2’-O-β-D-glucopyranoside(31),(2R,3R)-二氢山柰酚.7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷((2R,3R)-Dihydrokaempferol-7-O-β-D-glucoside,32),卞醇-β-巢菜糖苷(Benzylalcohol-β-vicianoside,33 ),Everlastoside C(34),Helicioside A(35),EverlastosideD(36),5,7-Dihydroxyphthalide-7-O-β-D-gentiobioside(37),苯甲酸-β-D-龙胆二糖苷(Benzoic acid-β-D-gentiobioside,38),(2S,3S)-1-Phenl-2,3-bunediol-2-O-β-D-glucopyranosyl-(1-6)-β-D-glucopyranoside(39),木犀草素-3-甲氧基-6-羟基-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Luteoiin-3-methoxyl-6-hydroxy-7-O-β-D-glucopyranoside,40),金鱼草素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Aureusidin-6-O-β-D-glucpyranoside,41),黄芩素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Scutellarein-7-O-β-D glucopyranoside,42),山柰酚-3-O-(3-β-D-吡喃葡萄糖基)-β-D-吡喃葡萄糖苷(Kaempferol-3-O-(3-β-D-glucopyranosyl)-β-D-glucopyranoside,43),苯乙醇-β-D-龙胆二糖苷(Phenethanol-β-D-gentiobioside,44 ),Maltot-3-O-β-D-apiofuranosyl-(1-6)-O-β-D-glucopyranoside(45),(2R)-圣草素-5-O-β-D-吡喃葡萄糖苷((2R)-Eriodictyol-5-O-β-D-glucopyranoside,46 ),3-O-p-Coumaroylshikimicacid-4-O-β-D-glucopyranoside(47),(2R)-柚皮素-5-O-β-D-龙胆二糖苷((2R)-Naringenin-5-O-β-D-gentiobioside,48),(2S)-柚皮素-5-O-β-D-龙胆二糖苷((2S)-Naringenin-5-D-β-D-gentiobioside,49),木犀草素-6-羟基-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Luteolin-6-hydroxy-7-O-β-D-glucopyranoside,50),芹菜素-7-O-β-D-龙胆二糖苷(Apigenin-7-O-β-D-gentiobioside,51),斛皮素-3-O-芸香糖苷(Quercetin-3-O-rutinoside,52),山柰酚-3-O-β-D-龙胆二糖苷(Kaempferol-3-O-β-D-gentiobioside,53),2,4,6-Trihydroxylacetophenone-2,4-di-O-β-D-glucopyranoside(54),(2R)-柚皮素5,7-二氧-β-D吡喃葡萄糖苷((2R)Naringenin-5,7-di-O-β-D-glucopyranoside,55),(2S)-柚皮素-5.7-二氧-β-D吡喃葡萄糖苷((2S)-Naringenin-5,7-di-O-β-D-glucopyranoside,56),(2S)-柚皮素-5,4′-二氧-β-D-吡喃葡萄糖苷((2S)-Naringenin-5,4′-di-O-β-D-glucopyranoside,57),芹菜素-4′,7-二氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(Apigenin-4′,7-di-O-β-D-glucopyranoside,58),山柰酚-3,4′-二氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(Kaempferol-3,4′-di-O-β-D-glucopyranoside,59),Chalonaringenin-2′,4′-O-β-D-glucopyranoside(60),斛皮素-3,3′-二氧-β-D-吡喃葡萄糖苷(Quercetin-3,3′-di-O-β-D-glucopyranoside,61 ),Chalonaringenin-2′-O-β-D-gentiobioside(62),ArenariumosideⅡ(63),芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯(Apigenin-7-O-β-D-glucopyranosiduronic acid methyl ester,64 ),ArenariumosideⅢ(65 ),Everlastoside E(66),ArenariumosideⅣ(67)。其中化合物2、3、4、21、23、24、27、28、34、36、37、39、47、48、49、57、62、63、65、66、67为21个未见文献报道的新化合物,化合物1、5、6、7、8、9、10、13、14、18、19、20、22、25、26、29、32、33、35、38、40、41、42、43、44、45、46、50、51、52、54、55、56、58、59、60、61、64为从该属植物中首次分离得到的38个化合物,11为从该植物中首次分离得到的化合物。降脂活性研究:1论文考察了沙生蜡菊花的甲醇提取物、乙酸乙酯萃取物、甲醇洗脱物及水层部分对小鼠肝脏细胞中脂肪含量的影响,结果表明甲醇提取物、乙酸乙酯萃取物、甲醇洗脱物均能显著降低小鼠肝脏中的脂肪含量,水层部分没有显著的作用。2论文考察了沙生蜡菊花中的单体化合物1、11、12、14、15、16、31、45、47对小鼠肝脏中脂肪含量的影响,实验结果表明,化合物11、14、15、31、47具有显著的降脂作用,其中以31、47最为显著。由此推测沙生蜡菊花中发挥降脂活性的物质基础是黄酮、二氢黄酮、查耳酮以及酚酸类化合物。3论文进一步考察了山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(15)及其苷元对小鼠内脏脂肪蓄积的影响,以小鼠体重、内脏脂肪含量以及血浆中甘油酸酯、总胆固醇、游离脂肪酸、葡萄糖的含量为考察指标,对比分析了糖苷与苷元的降脂活性,实验结果表明山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的降脂活性明显强于山柰酚。
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