针对三聚氰胺污染及违法添加问题,本论文对三聚氰胺的酶联免疫分析方法开展了研究。本研究首次用双胍和氯乙酸乙酯在甲醇钠条件下制备6-氯甲基-1,3,5-三嗪-2,4-二氨基,6-氯甲基-1,3,5-三嗪-2,4-二氨基与3-巯基丙酸反应合成三聚氰胺半抗原3-((4,6-二氨基-1,3,5-三嗪-2-基)-甲硫基)丙酸。采用活化酯法将半抗原与卵清白蛋白偶联制备免疫原,免疫新西兰大白兔获得了高效价的抗血清,抗血清效价约200000。抗血清采用Protein A-Sepharose 4B亲合层析法纯化。采用活化酯法将半抗原与牛血清蛋白偶联制备包被原,与辣根过氧化氢酶偶联制备酶标抗原。经过优化确定间接竞争酶联免疫检测方法的最佳工作条件,包被原的包被量为0.005 μg/孔、抗体稀释倍数为1：4000、封闭液为0.5%脱脂乳粉/PBS,方法对三聚氰胺的检测灵敏度(IC50)为45.45±2.62ng/mL,检测限(IC1s)为2.72±0.18 ng/mL。经过优化确定直接竞争酶联免疫检测方法的最佳工作条件,抗体包被量为1.0μg/孔、酶标稀释倍数为1：800、封闭液选用0.5%脱脂乳粉/PBS,建立直接竞争酶联免疫检测方法,方法对三聚氰胺的检测灵敏度(ICso)为7.8±1.3μg/mL,检测限(IC15)为0.66±0.18 ng/mL。除对环丙氨嗪有交叉反应外,对其他三嗪类物质几乎没有交叉,说明抗体具有很好的特异性。选择牛奶、奶粉及其他乳制品作为样品进行添加回收实验,牛奶的回收率为79.3%-93.6%之间,奶粉的回收率为94.1%到113.2%之间,二者的变异系数(n=3)均小于20%。使用液相色谱-质谱/质谱方法验证本实验建立的直接竞争酶联免疫方法,两种方法检测的结果具有较高的一致性,线性回归方程为y=0.8266x+20.791,相关性系数R2=0.968,表明所建立的直接竞争酶联免疫检测方法具有很好的准确性和精密度。本研究建立的直接竞争酶联免疫检测方法灵敏度高,特异性好,准确度好,样品前处理简单,适合多种乳及乳制品中三聚氰胺的快速检测。