动脉粥样硬化（AS）导致的心脑血管疾病是当今人类死亡的首要原因。虽然AS的概念已提出近百年,但其发病机制尚未完全明了。AS的发生是一个多种因素在多层次上综合作用的过程。血脂水平的升高伴随着促炎因子的表达和免疫反应的激活,单核细胞活化成为巨噬细胞,血管壁脂质过氧化导致大量ox-LDL生成,巨噬细胞通过吞噬ox-LDL及其一系列信号分子的表达导致脂质代谢的障碍,并最终形成泡沫细胞。泡沫细胞的形成是AS早期变化的特征性标志,巨噬泡沫细胞的形成及其作用是动脉粥样硬化斑块损伤形成、发展和崩解的关键。因此,在调脂抗炎的同时,影响巨噬泡沫细胞的形成作为AS治疗的新策略日益受到重视。三七皂苷（PNS）是从三七根部提取的有效成分,主要含人参皂苷Rg1、Rb1、三七皂苷R1等。我室既往的研究证实,PNS能通过炎症免疫调节、增加动脉粥样硬化斑块稳定性、抗自由基等机制发挥防治AS的作用。但是药物作用的物质基础及机制的不明确成为制约PNS充分、合理应用的重要因素。因此,立足于PNS的有效性,以现代药理研究方法和新技术为平台,我们以巨噬泡沫细胞形成这一脂质代谢和炎症反应相互交汇的AS早期事件为切入点,研究了PNS单体及其单体配伍对AS过程中泡沫细胞形成的影响,并探讨其可能的作用机制。方法1.32只雄性日本大白兔,随机分成4组:对照组、AS模型组、PNS低剂量组、PNS高剂量组,分别用下列饲料喂养:（1）基础饲料,（2）高脂饲料,（3）高脂饲料+低剂量PNS（60mg/kg）,（4）高脂饲料+高剂量PNS（120mg/kg）。实验周期12w。通过测定血清中TC、TG、LDL、MDA水平、SOD活性、主动脉苏丹Ⅳ染色及主动脉组织切片HE染色确定家兔AS模型的建立、泡沫细胞的形成及PNS的影响。2.收集昆明种小鼠腹腔巨噬细胞,培养与纯化后,分为5组:（1）对照组,（2）模型组,（3）PNS低剂量组(20μg·ml^-1),（4）PNS中剂量组(40μg·ml^-1),（5）PNS高剂量组(80μg·ml^-1)。各组细胞置5%CO₂、37℃孵箱培养72h。油红O染色进行形态学观察,用酶法测定细胞内TC及FC,Lowry法测定细胞内蛋白质。3.正交设计实验:根据预实验结果,选取皂苷单体Rg₁、Rb₁、R₁为考察因素,每个因素各选择10^-4、10^-5、10^-6M三个剂量为考察水平,以胆固醇酯为指标,进行正交实验,分别确定皂苷单体Rg1、Rb1、R1及其配伍对泡沫细胞形成的影响。4.收集昆明种小鼠腹腔巨噬细胞,培养与纯化后,分为7组:对照组、模型组、PNS(80μg·ml^-1)组、单体配伍组(含10^-5M R1、10^-5M Rg1、10^-6M Rb1)、R1(10^-5M)组、Rg1(10^-5M)组和Rb1(10^-6M)组。各组细胞置5%CO₂、37℃孵箱培养72h。RT-PCR方法测定巨噬细胞内ACAT-1 mRNA、Adipophilin mRNA、ABCA1 mRNA、CD36 mRNA和LXRαmRNA表达;用Western blot方法测定巨噬细胞内CD36蛋白表达。结果1.AS模型兔主动脉内膜下大量泡沫细胞积聚,动脉粥样硬化斑块面积显著增加;高剂量PNS可明显减少泡沫细胞的形成,降低动脉粥样硬化斑块面积（p＜0.01）。2.AS模型组家兔血清中TC、TG、LDL-C水平均显著高于对照组（p＜0.01）;与AS模型组相比,高剂量PNS能非常显著降低TC、TG、LDL-C水平（p＜0.01）,低剂量PNS能显著降低家兔血清中TC水平（p＜0.05）,TG、LDL-C水平无统计学差异（p＞0.05）。3.AS模型组动物血清中MDA水平明显升高（p＜0.01）,SOD活性明显下降（p＜0.01）;PNS高剂量组血清中MDA水平明显低于AS模型组（p＜0.01）,而SOD活性显著升高（p＜0.01）;PNS低剂量组血清中MDA水平低于AS模型组（p＜0.05）,而SOD活性无明显升高。4.体外培养的巨噬细胞,未经处理的细胞形态多呈梭形,油红O染色无着色;与ox-LDL共培养后,油红O染色阳性细胞遍布,且细胞体积明显增大,形态多呈圆形或不规则形;PNS中、高剂量组细胞油红O染色阳性细胞比模型组明显减少,形态渐趋正常,而PNS低剂量组细胞与模型组相比无明显变化。5.模型组细胞内TC、FC、CE水平呈显著高于对照组（p＜0.01）,且CE/TC有显著性差异（p＜0.01）;与模型组相比,PNS高、中剂量组细胞内TC、FC、CE水平及CE/TC均有显著性降低（p＜0.01）,PNS低剂量组除TC、CE显著降低外（p＜0.01）,其它无明显变化;PNS各剂量组间细胞内TC、FC、CE水平及CE/TC均有显著性差异（p＜0.01）。6.正交实验表明,皂苷单体R1、Rg1、Rb1效应均显著,并且R1×Rb1和Rg1×Rb1的交互作用显著（p＜0.01）,其最佳单体配伍组合是:Rg1:R1:Rb1=10^-5:10^-5:10^-6M。7.PNS单体配伍能显著降低与ox-LDL共培养巨噬细胞中CE/TC（%）值,与高剂量PNS相比无显著差异。8.ox-LDL诱导巨噬细胞CD36 mRNA表达显著增加（p＜0.01）;PNS组和单体配伍组均能非常显著地降低CD36 mRNA表达（p＜0.01）,Rg1、R1组可显著降低CD36 mRNA表达（p＜0.05）,Rb1组无显著性差异（p＞0.05）;与PNS组相比,单体配伍组、Rg1组、R1组无显著性差异。9.ox-LDL诱导巨噬细胞Adipophilin mRNA表达显著增加（p＜0.01）;与模型组相比,PNS组、单体配伍组、Rg1、Rb1、R1组Adipophilin mRNA的表达与模型组无显著差异。10.模型组LXRαmRNA表达显著增加（p＜0.05）;PNS组和单体配伍组、Rg1、R1组均能非常显著地增加LXRαmRNA表达（p＜0.01）,Rb1组无显著性差异（p＞0.05）;与PNS组相比,单体配伍组无显著性差异（p＞0.05）,Rg1组有显著性差异（p＜0.05）,R1、Rb1组有非常显著差异（p＜0.01）。11.模型组ABCA1 mRNA表达较对照组显著增加（p＜0.05）;与模型组相比,PNS组、单体配伍组均能非常显著地增强ABCA1 mRNA表达（p＜0.01）,R1组可显著增加ABCA1 mRNA表达（p＜0.05）,且三组之间无显著差异。12.模型组ACAT-1 mRNA表达显著增加（p＜0.01）;PNS组、单体配伍组和Rb1组均能非常显著地降低ACAT-1 mRNA表达（p＜0.01）,且三组之间无显著性差异。13.模型组CD36蛋白表达明显高于对照组（p＜0.01）;PNS组与单体配伍组CD36蛋白表达量较模型组有显著性降低（p＜0.01）,Rg1、R1组CD36蛋白表达量较模型组明显减少（p＜0.05）;与PNS组相比,单体配伍组、Rg1组和R1组无显著性差异（p＞0.05）。结论1.PNS通过减轻氧化应激、调节血脂水平和抑制巨噬细胞吞噬功能,防治家兔实验性AS和泡沫细胞的形成。2.PNS、PNS单体配伍均能抑制ox-LDL诱导的巨噬细胞源性泡沫细胞形成。3.PNS与PNS单体配伍下调ox-LDL诱导的CD36 mRNA、ACAT-1 mRNA表达及CD36蛋白表达,上调ABCA1 mRNA、LXRαmRNA的表达;Rg1可下调CD36mRNA及CD36蛋白表达、上调LXRαmRNA表达;Rb1下调ACAT-1 mRNA表达;R1下调CD36 mRNA及CD36蛋白表达、上调ABCA1 mRNA、LXRαmRNA的表达,从而减少巨噬细胞内胆固醇蓄积,促进其外流,从不同环节上影响泡沫细胞的生成。4.本实验中,三七皂苷单体Rg1、Rb1、R1最佳配伍是:R1:Rg1:Rb1=10^-5:10^-5:10^-6,单体配伍对泡沫细胞的作用与PNS相当。因此,推测Rg1、Rb1、R1是PNS影响泡沫细胞形成的主要物质基础。