【摘 要】
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纳豆激酶（Nattokinase，NK）是从日本传统食品纳豆中分离到的、具有高效溶栓活性的蛋白激酶，它能够很好地弥补传统溶血栓药物的缺陷，极有可能开发为新一代口服制剂用于血栓性疾病的预防和治疗。本文对来源于纳豆芽孢杆菌的纳豆激酶原基因的克隆和表达开展了以下几个方面的研究工作：（1）将编码纳豆激酶前肽、成熟肽的pro-nk序列克隆到乳酸乳球菌表达载体pNZ8048上，构建表达质粒pFY002，电转化
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纳豆激酶（Nattokinase，NK）是从日本传统食品纳豆中分离到的、具有高效溶栓活性的蛋白激酶，它能够很好地弥补传统溶血栓药物的缺陷，极有可能开发为新一代口服制剂用于血栓性疾病的预防和治疗。本文对来源于纳豆芽孢杆菌的纳豆激酶原基因的克隆和表达开展了以下几个方面的研究工作：（1）将编码纳豆激酶前肽、成熟肽的pro-nk序列克隆到乳酸乳球菌表达载体pNZ8048上，构建表达质粒pFY002，电转化Lactococcus lacti sNZ9000，得到重组菌株L.lactis NZ9000（pFY002）。纤溶活性实验证实了重组基因工程菌NZ9000（pFY002）能够在胞内表达出有活性的纳豆激酶；对诱导剂乳链菌肽（nisinA）的浓度、温度、诱导时间对重组工程菌乳酸乳球菌产酶的影响进行初步探究。最佳的条件是NisinA终浓度为7.5ng/ml，诱导温度28℃，诱导时间3.5h，工程菌L.lactisNZ9000/pFY002纳豆激酶的表达量达到最大值98.55U/L。（2）以hisH基因作为同源重组的靶位点，构建基因整合型表达载体pFY008，利用营养缺陷型作为筛选标记，通过同源重组的方法将含有纳豆激酶原基因的表达盒PnisA-aprN整合到乳酸菌的基因组上，实现纳豆激酶在乳酸乳球菌中食品级的表达。构建食品级的基因工程菌，安全性高、稳定性好，能够表达出有活性的纳豆激酶，为新型溶血栓保健乳酸饮料的开发打下理论基础。
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