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Bystin最早在HT-H细胞中发现,是与Trophinin和Tastin结合的一种胞质蛋白。Trophinin是膜内在蛋白,通过同亲性结合调节细胞粘连,这种细胞粘连需要Bystin和Tastin两种胞质蛋白的参与。troplurun和tastin基因只在哺乳动物中发现,而bystin基因,在真核生物中是高度保守的。目前研究认为bystin主要参与核糖体的生物发生、胚胎的植入与发育等生命活动过程,但家蚕bystin的功能至今未有报道。
本试验从家蚕蛹cDNA文库中扩增到家蚕bystin基因的完整开放阅读框(ORF),将其命名为Bmbys(Bomby.mor.bystin)。该ORF序列长128.bp,编码427个氨基酸,预测分子量为49 kDa。我们将Bmbys基因克隆到原核表达载体pET-28a中,得到重组质粒pET-28a-Bmbys,经PCR、酶切和测序鉴定重组质粒是正确的。将该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用终浓度为0.1m.IPTG低温诱导Bmbys蛋白的表达。得到的Bmbys蛋白以可溶性形式存在,故用超声裂解菌体后离心所得的上清以亲和层析的方法纯化。以纯化所得蛋白为抗原免疫雄性新西兰兔,制备该蛋白的多克隆抗体,进一步用ELISA检测抗体的效价可达到1:10000以上。利用得到的抗体通过免疫化学方法检测Bmbys蛋白在家蚕发育过程中的表达情况,结果显示在发育的蚕卵中Bmbys的表达具有动态的组织特异性。Wester.blotting结果显示在蚕卵发育的早期Bmbys高表达,中期表达量较低或不表达,晚期表达量达到最高。不同发育阶段蚕卵的免疫组化试验结果表明在蚕卵发育的早期Bmbys蛋白主要在卵黄细胞核和胚胎滋养层细胞中表达,发育的晚期Bmbys蛋白主要定位于马氏管,而在发育中期未检测到Bmbys的表达,与Wester.blotting结果一致。提取家蚕五龄幼虫各组织的总蛋白,用于Wester.blotting实验,结果显示Bmbys蛋白只在马氏管中有表达,表明Bmbys可能与马氏管的发育有关。此外,我们还分析了Bmbys蛋白在家蚕Bm5细胞中定位,结果发现在细胞分裂期Bmbys定位于细胞质,但在非分裂期Bmbys定位于胞质和核仁。本试验对bystin的分子特征和表达分布进行了初步探索,为进一步对其功能的深入研究奠定了基础。