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本文以生物印迹技术（Bio-imprinting）为核心，以1-苯乙醇手性拆分反应为模型体系，制备高效生物印迹脂肪酶PPL，同时针对生物印迹酶在有机溶剂中分散度低，传质限制严重的缺陷，提出生物印迹酶纳米微囊和生物印迹酶单酶纳米凝胶制备新工艺，并将其应用于重要的光学活性药物前体1-苯乙醇的手性拆分中。主要结论如下：生物印迹脂肪酶PPL：利用生物印迹方法制得对1-苯乙醇具有手性拆分功能的生物印迹脂肪酶PPL，相比天然酶的活性和选择性有大幅提高。研究发现，S-(+)-扁桃酸乙酯和R-(+)-苯乙醇相结合是理想的印迹模板，最佳印迹pH为7.2，所得印迹酶转酯活性Ea=644.8U，E>2000；印迹酶表面呈多孔道分布，增大了酶与底物的接触表面积；印迹过程使得脂肪酶二级结构发生明显改变，其中α-螺旋的含量高于冻干后的天然酶，而β-折叠含量较天然酶降低。生物印迹脂肪酶PPL在1-苯乙醇拆分中的应用：优化得到1-苯乙醇拆分反应最佳条件：反应溶剂为异丙醚，催化温度35oC，反应底物摩尔比为1:3（1-苯乙醇:乙酸乙烯酯），酶浓度为62.5mg/ml，反应10h，转化率可达43.2%，接近拆分极限，E>2000，且具有较高的重复利用性和稳定性。生物印迹酶纳米微囊：为了提高生物印迹酶在有机体系中的分散度，提出利用壳聚糖-三聚磷酸钠（TPP）包埋制备生物印迹酶纳米微囊新工艺，最佳制备条件为：壳聚糖浓度为0.75%，壳聚糖与TPP的质量浓度比为1:1，体积比为1:1.5，最佳交联时间为10min，交联温度为15oC；所制得的纳米微囊呈大小均一，分散均匀的球状结构，直径约为50nm，在有机体系中分散度好；印迹酶在制为纳米微囊后，在等量蛋白浓度下，活性进一步提高。生物印迹酶单酶纳米凝胶：利用聚合物材料包埋制备单酶纳米凝胶，其制备工艺为：N-丙烯酰氧基琥珀酰亚胺浓度为7.5mg/ml，最佳pH为8；单酶纳米凝胶外形规则，粒径约为30~40nm，分布均匀，在有机体系中分散度好。然而，印迹酶在制为单酶纳米凝胶后，活性并未提高，略有降低，工艺尚待改进。