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本研究将MDR 1 1kb片段克隆到原核表达载体pET-28b(+)中,构建成重组质粒pETP-gp。将pETP-gp分别转入受体菌BL21(DE3)和BL21(DE3)plyss中,在IPTG的诱导下,两转化菌均可高效表达目的基因,其中BL21(DE3)plyss较高,其表达量可高达菌体蛋白总量的48%。免疫印记表明所表达的蛋白是P-gp特异性蛋白。这是MDR 1 1kb片段首次在E.coli中得到高效表达。以E.coli高效表达的MDR 1 1kb片段的蛋白为抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的兔抗人IgG为二抗,建立了检测MDR 1抗体的间接ELISA方法。确定了最佳反应条件和自行制备的兔抗人酶标抗体工作浓度。结果表明应用重组pETP-gp表达的蛋白检测MDR 1抗原具有特异性高,抗原易纯化,成本低等特点。将MDR 1和MDR 1 1kb片段分别克隆入pcDNA3中,构建了2种真核表达质粒pcDNA3/MDR 1和pcDNA3/P-gp。将2种质粒转染K562细胞,结果表明2种质粒可在体外表达MDR 1蛋白。动物试验表明2种质粒均可诱导产生MDR 1特异性免疫反应。将构建的表达质粒pcDNA3/P-gp,佐以司苯、甘油免疫小鼠,通过融合、筛选、克隆,获得了4株分泌抗MDR 1 McAb杂交瘤细胞株MdrA、MdrB、MdrC、MdrD。通过Western-blotting试验和间接ELISA法检测证明4株McAb可与pcDNA3/MDR 1、pcDNA3/P-gp和pHVaMDR 1 3种重组抗原反应。为临床检测MDR 1抗原创造有利条件。将MDR 1插入到腺病毒载体中,构建重组腺病毒质粒pHVaMDR 1。采用浓缩病毒上清转染法可有效地将外源性MDR 1导入脐血有核细胞中。该脐血有核细胞能表达P-gp,对化疗药物长春新碱、柔红霉素具有一定的耐受性。本实验分离和培养了昆明鼠胚胎干细胞。并把MDR 1导入小鼠胚胎干细胞后回输入同种小鼠体内后,受体鼠对化疗药物的耐受性有所增强,从而在动物水平证实了通过MDR 1的导入在体内保护骨髓细胞的可行性。也为解决恶性肿瘤病人在化疗中的骨髓抑制提供了可靠的试验依据。