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第一部分新型BTK抑制剂AC0010对套细胞淋巴瘤的作用目的:比较新型BTK抑制剂AC0010与进口 BTK抑制剂Ibrutinib在体内外对套细胞淋巴瘤作用的敏感性及安全性。方法:(1)采用MTS法检测不同浓度的AC0010和Ibrutinib对套细胞淋巴瘤细胞株Jeko-1、JVM-2、原代MCL细胞及正常外周血细胞的增殖抑制作用;(2)采用流式细胞术检测不同浓度的AC0010和Ibrutinib对Jeko-1、JVM-2的促凋亡作用及周期阻滞作用;(3)采用尾静脉注射JVM-2细胞的方式构建MCL小鼠模型,研究AC0010在体内的作用效果及安全性,并与Ibrutinib的疗效进行对比;(4)统计学分析,单一变量两组间比较采用t检验,Kaplan-Meier法进行生存分析,p<0.05认为有统计学差异。结果:(1)不同浓度的AC0010和Ibrutinib作用于MCL细胞株Jeko-1、JVM-2 24和48小时,两药均能抑制细胞生长,具有浓度及时间依赖性,但AC0010对细胞株生长的抑制作用明显强于Ibrutinib;(2)不同浓度的AC0010和Ibrutinib作用于原代MCL细胞24h,两药均能抑制原代MCL细胞生长,但AC0010对原代MCL细胞生长的抑制作用明显强于Ibrutinib;(3)不同浓度的AC0010和Ibrutinib作用于人正常外周血细胞无明显生长抑制作用;(4)不同浓度的AC0010和Ibrutinib作用于Jeko-1、JVM-2细胞24h,随着药物浓度的增大,AC0010诱导细胞凋亡的现象越来越明显,而相同浓度的Ibrutinib则不能诱导明显的细胞凋亡;(5)不同浓度的AC0010和Ibrutinib作用于Jeko-1、JVM-2细胞24h后,AC0010能引起JVM-2细胞周期阻滞在G0/G1期,对Jeko-1细胞无明显的周期阻滞作用,而Ibrutinib对Jeko-1和JVM-2细胞均无明显的周期阻滞作用;(6)体内实验中,大剂量(300mg/kg)AC0010能够显著延长MCL小鼠的生存时间(p<0.001),低剂量(30mg/kg)和中剂量(100mg/kg)的AC0010不能延长MCL小鼠的生存。结论:(1)AC0010抑制Jeko-1、JVM-2及MCL原代细胞增殖的作用均强于Ibrutinib且对正常外周血细胞无明显抑制作用;(2)AC0010诱导Jeko-1、JVM-2细胞凋亡的作用明显强于Ibrutinib;(3)AC0010可引起JVM-2细胞周期阻滞在G0/G1期;(4)AC0010能够延长MCL小鼠的生存。第二部分新型BTK抑制剂AC0010对套细胞淋巴瘤作用的机制目的:探究新型BTK抑制剂AC0010对套细胞淋巴瘤作用的分子机制,为该药用于临床治疗MCL提供实验依据。方法:(1)不同浓度的AC0010处理Jeko-1、JVM-2细胞24h后,采用q-PCR的方法检测BTKmRNA的表达情况;(2)用B细胞抗原受体(BCR)激发实验检测AC0010对BTK磷酸化的作用是否可逆;(3)不同浓度的AC0010处理Jeko-1、JVM-2细胞24h后,采用Westem-blot的方法检测BTK蛋白及p-BTK蛋白的表达情况;(4)不同浓度的AC0010处理Jeko-1、JVM-2细胞24h后,采用Westem-blot的方法检测凋亡相关蛋白、BCR-BTK及PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达情况。结果:(1)AC0010作用于Jeko-1、JVM-2细胞后,BTKmRNA的表达无明显变化;(2)BCR被anti-IgG F(ab’)2激活后,AC0010处理过的细胞中p-BTK的表达明显降低;(3)AC0010处理Jeko-1、JVM-2细胞后,BTK蛋白的表达无明显变化,而p-BTK的表达出现明显下调;(4)AC0010 处理 Jeko-1、JVM-2 细胞后,caspase 家族中的 PARP 及 caspase3出现了明显的剪切带,Bcl家族中的抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl出现下调,而促凋亡蛋白Bim、Bax出现上调;(5)AC0010作用于Jeko-1、JVM-2细胞后,BTK下游主要蛋白出现下调,如 p-PLCγ2、p-IKK、p-NF-κB 等;PI3K/AKT 信号通路相关蛋白如 PI3K、p-AKT、p-GSK3β等出现下调。结论:(1)AC0010能够不可逆地抑制BTK的磷酸化,抑制蛋白功能,而对其转录及翻译过程无影响;(2)AC0010通过caspase家族和Bcl家族诱导MCL细胞株的凋亡;(3)AC0010通过抑制BCR-BTK及PI3K/AKT信号通路实现对MCL的杀伤作用。