猪血凝性脑脊髓炎是由猪血凝性脑脊髓炎病毒（Porcine hemagglutinating en cephalomyelitis virus,PHEV）引起猪的一种高度接触性传染病,已对多个国家的养猪业造成较大的经济损失,目前尚无特异性的抗病毒药物和治疗方法。前期研究发现,PHEV感染能引起神经细胞自噬,且该病毒复制增殖与自噬呈负相关;此外,PHEV感染能下调颗粒蛋白前体（Progranulin,PGRN）表达引发神经损伤。研究表明,海藻糖（Trehalose,TRE）是一种无毒的二糖并且能够通过血脑屏障,它在体内外通过引起自噬以及上调PGRN的表达,在治疗包括亨廷顿氏病和帕金森病等神经退行性疾病方面具有广阔的前景。海藻糖是否通过调控自噬或PGRN表达发挥抗PHEV的作用尚不清楚。为明确海藻糖抗PHEV效果,本研究以PHEV感染小鼠神经瘤母细胞（Neuro-2a,N2a）为细胞模型,首先根据细胞活性实验结果确定海藻糖使用浓度为100m M。其次,通过先加海藻糖后接种病毒,先接种病毒后加海藻糖或同时加病毒和海藻糖的方法处理细胞,应用Western Blot、q RT-PCR和免疫荧光方法检测,发现海藻糖可显著降低病毒在细胞中的含量,表明海藻糖在体外具有显著的抗病毒复制效果。此外,以PHEV感染小鼠为模型,研究发现海藻糖处理组小鼠脑组织中PHEV总量与对照小鼠相比显著降低,表明海藻糖在体内也具有显著的抗病毒效果。海藻糖可通过不依赖m TOR途径诱导N2a细胞发生自噬。为解析自噬在海藻糖抗PHEV过程中的作用,本研究分别使用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-Methyladenine,3-MA）与自噬诱导剂雷帕霉素（Rapamycin,RAPA）处理N2a细胞再接种病毒。Western Blot检测证明抑制自噬能减弱海藻糖抗PHEV复制效果,经m To R途径诱导自噬可加强海藻糖抗PHEV的效果,研究结果表明自噬途径在海藻糖抑制PHEV复制过程中发挥了重要作用。前期研究发现,PHEV感染显著下调与溶酶体损伤密切相关的PGRN和组织蛋白酶D（CTSD）的表达,同时导致溶酶体的体积增大等损伤性变化。而本研究通过先接毒后加海藻糖处理细胞,经Western Blot和间接免疫荧光检测,发现海藻糖具有能缓解PHEV引发的PGRN表达下调,并恢复溶酶体形态,提高CTSD表达等作用,表明海藻糖可能通过上调PGRN修复PHEV引发的溶酶体损伤。此外,为明确PGRN在海藻糖抗病毒过程中的作用,本研究将PHEV感染过表达或敲除PGRN的N2a细胞后,加入海藻糖,通过Western Blot检测病毒含量变化,发现过表达PGRN并没有显著地影响海藻糖的抗病毒效果,但敲除PGRN后海藻糖抗PHEV效果消失,表明PGRN在海藻糖抗PHEV过程中发挥重要的调控作用。总之,本研究明确海藻糖在体内外均具有显著的抗PHEV复制的作用,其对PHEV感染小鼠模型具有较好的防治效果,并初步揭示了PGRN在海藻糖抗PHEV过程中发挥积极作用。研究结果可为兽医临床中抗PHEV药物的开发提供重要的理论依据。