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背景和目的近年我国南方部分地区发生了甲型副伤寒杆菌(Salmonellaparatyphi A)感染引起的甲副伤寒暴发流行。由于甲型副伤寒杆菌无荚膜多糖,故目前采用的荚膜多糖Vi疫苗无预防甲型副伤寒的效果。因此,寻找甲型副伤寒杆菌表面抗原,研制甲型副伤寒疫苗,对于预防和控制甲型副伤寒的流行具有重要意义。而外膜蛋白(outer membrane proteins,OMP)通常是沙门菌等革兰阴性菌的主要表面抗原成分。本研究中,我们构建了甲型副伤寒杆菌ompA基因原核表达系统,鉴定了重组表达产物rOmpA的免疫原性,检测了我国甲型副伤寒杆菌临床菌株ompA基因携带率,采用小鼠感染模型初步了解了rOmpA的免疫保护作用,以期为rOmpA作为甲型副伤寒杆菌基因工程疫苗的候选抗原提供依据。内容和方法采用PCR从甲型副伤寒杆菌临床株JH01中扩增ompA基因,T-A克隆后测序并构建ompA基因原核表达系统。采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检测rOmpA表达情况及其产量,采用免疫扩散法、微量肥达试验和Western blot鉴定其抗原性和免疫反应性。采用PCR检测98株甲型副伤寒杆菌临床菌株ompA基因携带率。采用小鼠感染模型,了解rOmpA对甲型副伤寒杆菌50001株感染的免疫保护作用。结果与报道的相关序列比较,所克隆的ompA基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100%。rOmpA表达量约为细菌总蛋白的65%。rOmpA免疫家兔可产生抗体,并能与其兔抗血清和甲型副伤寒杆菌全菌抗血清产生阳性Western杂交信号。94.9%(93/98)甲型副伤寒杆菌临床菌株含有ompA基因。100μg和200μgrOmpA对感染小鼠的免疫保护率分别为41.7%(5/12)和58.3%(7/12)。rOmpA免疫小鼠或保护试验存活小鼠血清对各副伤寒杆菌H抗原的凝集效价为1:5～1:40。结论ompA基因在甲型副伤寒杆菌临床菌株中分布广泛。rOmpA有良好的免疫原性和一定的免疫保护作用,可作为甲型副伤寒杆菌基因工程疫苗候选抗原。