研究背景:视神经脊髓炎谱系病(NMOSD)是一种具有较为严重致残性的中枢神经系统自身免疫性炎性脱髓鞘疾病,临床上常表现为严重的视神经炎和(或)横贯性脊髓炎,其确切病因及发病机制仍是目前的研究热点及难点。为提高NMOSD的识别和诊断,探寻更行之有效的防治方法,国内外研究人员对此进行了广泛、深入的不懈探索,旨在降低该病的致残率,改善其预后,从而使广大NMOSD患者的生活质量得到提高。目的:本研究尝试建立视神经脊髓炎谱系病患者外周血B淋巴细胞受体的重链互补决定区3(Ig H-CDR3)的免疫组库,通过分析NMOSD患者疾病不同阶段免疫组库的特征,并结合其临床资料,初步研究其免疫组库多样性的变化和Ig H-CDR3优势取用序列的状况等信息与NMOSD疾病发生、进展及治疗干预的相关性。研究方法:收集2015年5月至2017年12月于我院门诊或住院经确诊的女性NMOSD患者的新鲜外周血,采集其临床资料及实验室检查资料,其中NMOSD患者共6例,将其分为治疗早期及稳定期分别留取两次外周血标本,并取同一时期在我院体检的女性健康志愿者6例作为正常对照组,共计纳入18个样本。所有研究对象外周血标本统一送往武汉华大基因公司进行检测,本研究中运用多重PCR技术特异性扩增研究对象外周血B细胞Ig H-CDR3区域的核苷酸序列,扩增后的产物采用第二代高通量测序技术进行免疫组库测序,并将测序结果和临床资料相结合进行分析,解析NMOSD患者的免疫组库特征。结果:本研究成功构建起6例NMOSD患者及6例健康志愿者,共计18个样本的外周血B细胞Ig H-CDR3免疫组库;发现NMOSD患者组外周血B细胞Ig H-CDR3总数及种类较正常对照组均有所下降;相较于正常对照组,NMOSD患者组外周血Ig H-CDR3序列库的多样性也有降低的趋势,并且NMOSD患者治疗早期Ig H-CDR3序列库的多样性相较于稳定期也普遍较高;通过与正常对照组进行比较,揭示NMOSD患者的等位基因IGHV1-69、IGHV3-23、IGHJ1、IGHJ2、IGHJ3、IGHJ4的使用频率较正常对照组高,与之相反,等位基因IGHV1-8、IGHV3-30、IGHJ5、IGHJ6的使用频率较正常对照组低;本研究筛选出2种疾病特征性的优势取用序列“CASSICLGSGCGGYYYGMDVW”、“CARPNYYGSVRTGYGMDVW”,其中特征性序列“CASSICLGSGCGGYYYGMDVW”在NMOSD治疗早期患者组中高度表达,其克隆频次明显高于稳定期NMOSD患者及健康志愿者,且差异具有统计学意义。结论:本研究构建了6例NMOSD患者治疗早期及稳定期外周血B细胞Ig H-CDR3的免疫组库,通过分析NMOSD患者外周血B细胞Ig H-CDR3免疫组库的多样性、疾病特征性优势取用序列的表达情况和V、J基因使用频率等信息,并结合NMOSD患者的临床资料,发现免疫组库多样性及疾病特征性优势取用序列的克隆扩增情况可有效反映NMOSD患者的疾病状态,并可评估其治疗效果。本研究也揭示了NMOSD疾病发生及进展可能与具有特异性Ig H-CDR3序列的外周血B细胞大量克隆扩增密切相关,进行进一步研究或可为临床免疫治疗提供相应的分子靶点和重要的理论基础。