单抗是重要的生物技术药物,现有的蛋白A亲和层析的抗体纯化平台技术无法满足巨大的抗体市场需求,有必要开发新的分离方法。连续流层析是一种新型层析分离模式,是生物连续制造的重要环节,但对相关影响因素的研究还不够深入。本文围绕双柱连续流层析捕获抗体,探讨连续流层析分离的关键因素,比较传统批次层析和连续流层析的分离性能,分析不同蛋白A亲和介质在连续流层析分离单抗过程中的表现,为连续流层析过程开发和应用提供指导。以典型蛋白A亲和介质MabSelect SuRe与两种新型介质(Resin A和Resin B)为模型,考察了保留时间和蛋白浓度对双柱连续流层析过程的影响。结果表明,随保留时间增加,三种介质的产率都呈现先增加后减小的趋势,介质利用率则持续增加,双柱连续流层析的介质利用率(70%以上)远远高于批次层析过程(20～50%),缓冲液消耗降低50%以上。而随着蛋白浓度增大,产率显著增大,介质利用率和缓冲液消耗则变化不大。比较三种介质,Resin B载量最高,拥有最好的分离性能,保留时间1 min时产率达到43.0 g/(L·h)。考察了三种介质用连续流层析从细胞培养液中分离单抗,结果显示单抗纯度、聚集体含量和HCP含量均与批次层析没有显著差异,单抗纯度在98%以上,聚集体含量在1%～2.5%之间,HCP含量约200～600 ppm。相比较而言,Resin B拥有最优的分离性能,收率96%,产率达到37.5 g·L-1·h-1,缓冲液消耗较批次层析降低62%。考察了不同柱高的影响,发现较短的层析柱更有利。最后测试了AutoMab自动上样控制,发现过程稳定,各个循环的洗脱蛋白量接近,浓度差异小于3%。纯度98%以上,证实了双柱连续流层析分离单抗的可行性。本文围绕双柱连续流层析分离抗体,系统考察了不同条件对分离性能的影响。优化了操作参数,并应用于实际料液分离,实现了单抗的连续捕获,相关过程设计方法为连续流层析过程开发提供了思路。